Confident quantitation of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma for clinical research by liquid chromatography-tandem mass spectrometry with simple, robust sample preparation

Význam tématu

25-hydroxyvitamin D je klíčový biomarker pro posouzení nutričního a zdravotního stavu jedince s ohledem na metabolismus vápníku a fosfátů.
Analýza hladin 25-hydroxyvitaminu D2 a D3 v lidské plasmě je nezbytná pro klinický výzkum a diagnostiku různých onemocnění, včetně kostních poruch a metabolických onemocnění.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit kvantitativní metodiku pro stanovení 25-hydroxyvitaminu D2 a D3 v lidské plasmě pomocí LC-MS/MS.
Metoda byla implementována na systému Thermo Scientific Transcend LX-2 spojeném s triple-quadrupole hmotovým spektrometrem TSQ Quantis.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky lidské plazmy o objemu 50 µl byly zpracovány srážením proteinů acetonitrilem obsahujícím izotopový interní standard d6-25-hydroxyvitamin D3.
Separace byla provedena na kolóně Hypersil GOLD (50 × 2,1 mm, 1,9 µm) při 40 °C s mobilními fázemi voda/methanol (10 mM mrav. formiátu, 0,1 % kys. mrav.) ve gradientním režimu, celkový čas běhu 3,5 minuty.
Detekce probíhala v ionizačním režimu APCI+ pomocí módu SRM se dvěma přechody pro kvantifikaci a potvrzení obou analyzovaných látek.

• LC systém: Thermo Scientific Transcend LX-2 multikanálový UHPLC
• Kolona: Thermo Scientific Hypersil GOLD 50 × 2,1 mm, 1,9 µm
• MS: Thermo Scientific TSQ Quantis triple-stage quadrupole s APCI

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vynikající linearitu v rozsahu 9–81 ng/ml pro D2 a 9–79 ng/ml pro D3.
Bias mezi nominálními a stanovenými hodnotami byl vždy v intervalu ±10 %.
Intra-assay přesnost (CV) byla nižší než 3,6 %, inter-assay CV nepřekročilo 4,1 %.
Nedošlo k významnému carryover, blank vzorky po vysokých kalibrátorech nevykázaly detekovatelný signál.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí jednoduchou a rychlou přípravu vzorků s minimem pracnosti.
Multikanálové LC významně zvyšuje propustnost analýzy při zachování citlivosti.
Vysoká přesnost a spolehlivost dělá metodu vhodnou pro klinický výzkum i rutinní laboratorní provoz.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu analýz o další metabolity vitamínu D a další mastně rozpustné vitamíny.
Automatizace přípravy vzorků a integrace s vysokorozlišovacím MS pro širší spektrální charakterizaci.
Implementace metody v personalizované medicíně a monitorování efektivity terapeutických intervencí.

Závěr

Vyvinutý LC-MS/MS postup využívající multikanálové oddělování a APCI detekci je robustní, citlivý a vysoce propustný.
Metoda splňuje požadavky na přesnost a opakovatelnost potřebné pro klinický výzkum 25-hydroxyvitaminu D.

Reference

V textu nebyly uvedeny žádné explicitní literární citace.