Transfer of a compendial LC method for impurity analysis of chlorhexidine from a Waters Alliance HPLC system to a Vanquish Core HPLC system

Význam tématu

Chlorhexidin je běžně používané antiseptikum a jeho čistota je klíčová pro účinnost a bezpečnost zdravotnických a hygienických přípravků. Analýza nečistot podle monografie Evropské farmakopeje garantuje konzistentní kvalitu. Přenos standardizované HPLC metody mezi různými systémy umožňuje laboratořím modernizovat vybavení a sjednotit analytické postupy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie je demonstrovat přenos HPLC metody pro analýzu nečistot chlorhexidinu z jednoho komerčního systému na jiný bez úprav původní metody. Studie porovnává Waters Alliance Quaternary systém s Vanquish Core Quaternary systémem z hlediska chromatografických parametrů, rozlišení a opakovatelnosti.

Použitá metodika

Reagencie a materiály

• Deionizovaná voda 18,2 MΩ•cm
• Acetonitril LC MS grade
• Trifluoroctová kyselina TFA LC MS grade
• Referenční standard chlorhexidinu dle monografie EP

Podmínky separace

• Kolona Hypersil GOLD C18 4,6×250 mm 5 µm
• Mobilní fáze A 0,1 % TFA ve vodě ACN 80:20 v/v
• Mobilní fáze B 0,1 % TFA ve vodě ACN 10:90 v/v
• Gradient 0–32 min 0–20 B, 37–47 min 20–30 B, 54–55 min návrat na 0 B, 62 min ukončení
• Průtok 1 ml/min
• Teplota kolony 30 °C
• Teplota autosamplera 8 °C
• Detekce DAD při 254 nm šířka pásma 6 nm
• Objem injekce 10 µl

Vzorek připraven rozpuštěním 5 mg standardu v 1 ml mobilní fáze A.

Použitá instrumentace

Waters Alliance Quaternary systém se Separation Module 2695 a PDA detektorem 2996. Vanquish Core Quaternary systém s pumpou C, Split Sampler CT, Column Compartment C a DAD CG s buňkou 11 µl. Použit kit pro přenos metod Vanquish.

Hlavní výsledky a diskuse

Přenos metody proběhl bez nutnosti úprav. Oba systémy poskytly obdobné chromatogramy s rozdíly v retenčních časech menšími než 4 %. Relativní retenční časy jednotlivých špiček odpovídají specifikacím monografie EP. Vanquish Core vykázal vyšší rozlišení špiček (cca 8 oproti požadovanému min 3) a lepší poměr špička údolí (>7 oproti min 2). Opakovatelnost byla u Vanquish Core zlepšena RSD retenčních časů <0,04 % a RSD ploch <0,5 % oproti 0,15 % respektive až 2,8 % u Alliance.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje hladký přechod na moderní HPLC systém při zachování validity kompendiální metody. Umožňuje zvýšit efektivitu laboratorních úloh, snížit dobu validace a zlepšit kontrolu kvality přípravků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření přenosu dalších kompendiálních metod na platformy UHPLC, využití softwarových nástrojů pro automatizaci přenosu metod, integrace on-line monitorování procesů v reálném čase (PAT) a širší aplikace v potravinářské a environmentální analytice.

Závěr

Studie prokázala úspěšný přenos metody pro analýzu nečistot chlorhexidinu mezi systémy bez úprav původního protokolu. Vanquish Core nabízí zachovanou chromatografickou kvalitu a navíc lepší rozlišení a opakovatelnost.

Reference

1. Swartz ME Krull I Analytical Method Transfer LCGC North America 2006 24(11) 1204–1214
2. Paul C Grübner M et al Thermo Scientific White Paper 72711 2018
3. Grübner M Thermo Scientific Application Note 72939 2019
4. Grübner M Paul C Steiner F Thermo Scientific Application Note 72717 2018
5. European Directorate for the Quality of Medicines HealthCare European Pharmacopoeia 10 0 2018 monograph 0658
6. World Health Organization Model List of Essential Medicines 21st edition 2019
7. United States Pharmacopeial Convention USP42 NF37 Chlorhexidine gluconate solution monograph 2019
8. European Directorate for the Quality of Medicines HealthCare Information Leaflet Ph Eur Reference Standard Chlorhexidine CRS batch 2
9. Franz H Wachinger T Schmidt C German Patent DE102015112900B4 2015
10. Thermo Fisher Scientific An73310 EN 0120S 2020