Quantitation Analysis of Human Insulin-like Growth Factor I (IGF1) in Serum by Using SPE-LC-MS/MS Workflow

Význam tématu

IGF1 je polypeptidový hormon klíčový pro růst a regeneraci tkání, jeho přesné stanovení v séru přispívá k diagnostice a výzkumu onemocnění od poruch růstu až po kancerská onemocnění.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout robustní a citlivou kvantitativní metodu LC-MS/MS pro stanovení IGF1 v séru v rozsahu 10–2430 ng/mL s minimální závislostí na protilátkách a vysokou reprodukovatelností.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda kombinuje proteinovou precipitaci s CHAPS a následnou SPE extrakci před LC-MS/MS analýzou.

• Příprava vzorku: precipitace v 0,1% CHAPS, acetonitril/kyselina octová, centrifugace a neutralizace 5% NH3.
• SPE podmínky (Agela PAX 96-well): aktivace 500 µL methanolu, equilibrace 500 µL 5% NH3, naložení 2×600 µL vzorku, proplachy 200 µL 5% NH3 a 200 µL 1/5/94 kyselina octová/methanol/voda, eluce 2× (25 µL methanol/voda/kyselina octová a 50 µL vody).
• Chromatografické podmínky: Waters ACQUITY UPLC CSH C18 (2.1×100 mm, 1.7 µm), mobilní fáze A 0,1% kyselina octová ve vodě, B 0,1% kyselina octová v metanol/acetonitril (3/1), gradient 10→80→95→10 %B v 5 min, průtok 300 µL/min, teplota 50 °C, objem injekce 20 µL.
• MS/MS (SCIEX Triple Quad 4500 / QTRAP 4500): Turbo V™ ion source, Curtain Gas™, ion spray 5500 V, teplota 550 °C, MRM přechody IGF1 m/z 957.2→473.5 a IS 973.5→473.5, dwell time 80 ms, DP 80/60, CE 47/48, CAD medium.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LLOQ 10 ng/mL, lineární rozsah 10–2430 ng/mL s korelačním koeficientem r=0,999 (váha 1/x). Přesnost se pohybovala mezi 91–106 %, opakovatelnost CV 5,6 % při 10 ng/mL. Kvantifikace neznámých vzorků prokázala shodu s očekávanými hodnotami (QC 113,2 %).

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost a specifita bez potřeby protilátek.
• Široký dynamický rozsah vhodný pro různé biologické koncentrace IGF1.
• Rychlý vývoj metody a vysoká propustnost ve farmaceutické i klinické praxi.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na multiplexní kvantifikaci dalších peptidů a hormonů. Očekává se automatizace workflow, zkrácení doby analýzy a širší nasazení ve výzkumu biomarkerů a personalizované medicíně.

Závěr

Vyvinutá SPE LC-MS/MS metoda poskytuje spolehlivé, citlivé a robustní stanovení IGF1 v séru s nízkou variabilitou a širokým dynamickým rozsahem, což podporuje její využití v terapeutickém výzkumu a klinické diagnostice.

Reference

1. Xu et al. Bioanalysis. 2014;6(24):3311–3323.
2. Li et al. J Anal Bioanal Tech. 2013;S5.
3. Chambers et al. Anal Chem. 2014;86:694–702.