Quantitation of Human Insulin-Like Growth Factor-1 and 2 by MRM LC-MS/MS with Scheduled Ionization
Aplikace | 2019 | SCIEXInstrumentace
Důsledné sledování hladin IGF-1 a IGF-2 je zásadní pro diagnostiku a výzkum růstových poruch, protože tyto proteiny regulují buněčný růst a metabolismus. Jejich analýza je komplikována silným vázáním na IGFBP proteiny a receptory, proto je nutná účinná disociace a selektivní detekce.
Studie představuje novou metodiku MRM LC-MS/MS pro kvantifikaci intactních hormonů IGF-1 a IGF-2 v biologických matricích. Klíčové prvky zahrnují použití detergentu CHAPS pro disociaci komplexů, optimalizovanou SPE čistící proceduru a využití naplánované ionizace k minimalizaci kontaminace MS.
Vzorky séra podstoupily proteinovou precipitaci a SPE na Strata-X-A 96well plate. Pro disociaci vazeb byla testována koncentrace CHAPS 1, 5 a 10 %, přičemž 5 % poskytla nejvyšší výtěžnost. Chromatografie probíhala na Phenomenex Kinetic C18 kolóně s lineárním gradientem vody a acetonitrilu s formiátem. Analýza se provádí na systémech SCIEX ExionLC AD spojeném se SCIEX QTRAP 6500+ nebo Triple Quad 6500+ za použití scheduled ionization v Analyst 1.7 a kvantifikace v MultiQuant 3.0.
Optimalizace přípravy ukázala, že 5 % CHAPS zdvojnásobuje návratnost IGF-1 oproti 1 %. Metoda dosáhla lineárního dynamického rozsahu 2–1000 ng/ml pro oba analyty, LOD 1 ng/ml a LOQ 2 ng/ml. Scheduled ionization úspěšně zabránila kontaminaci detektoru zbytkovým CHAPS. Pooled lidské sérum obsahovalo průměrně 119.4 ng/ml IGF-1 a 397.6 ng/ml IGF-2.
Nová workflow nabízí vysokou citlivost, rychlost a reprodukovatelnost pro bioanalytické aplikace. Díky minimální kontaminaci a jednoduché přípravě je vhodná pro rutinní sledování hormonů v klinických a výzkumných laboratořích.
Další rozšíření zahrnuje multiplexní analýzu několika proteinů současně a automatizaci přípravy vzorku. Potenciál se rýsuje v klinické diagnostice, monitoringu léčby a rozvoji personalizované medicíny.
Popsaná MRM LC-MS/MS metoda s optimalizovanou přípravou vzorku a naplánovanou ionizací poskytuje spolehlivou a citlivou kvantifikaci IGF-1 a IGF-2 v séru. Workflow splňuje požadavky na rychlou a robustní analýzu velkých molekul v komplexních matricích.
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QTRAP
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceSCIEX
Souhrn
Význam tématu
Důsledné sledování hladin IGF-1 a IGF-2 je zásadní pro diagnostiku a výzkum růstových poruch, protože tyto proteiny regulují buněčný růst a metabolismus. Jejich analýza je komplikována silným vázáním na IGFBP proteiny a receptory, proto je nutná účinná disociace a selektivní detekce.
Cíle a přehled studie / článku
Studie představuje novou metodiku MRM LC-MS/MS pro kvantifikaci intactních hormonů IGF-1 a IGF-2 v biologických matricích. Klíčové prvky zahrnují použití detergentu CHAPS pro disociaci komplexů, optimalizovanou SPE čistící proceduru a využití naplánované ionizace k minimalizaci kontaminace MS.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorky séra podstoupily proteinovou precipitaci a SPE na Strata-X-A 96well plate. Pro disociaci vazeb byla testována koncentrace CHAPS 1, 5 a 10 %, přičemž 5 % poskytla nejvyšší výtěžnost. Chromatografie probíhala na Phenomenex Kinetic C18 kolóně s lineárním gradientem vody a acetonitrilu s formiátem. Analýza se provádí na systémech SCIEX ExionLC AD spojeném se SCIEX QTRAP 6500+ nebo Triple Quad 6500+ za použití scheduled ionization v Analyst 1.7 a kvantifikace v MultiQuant 3.0.
Použitá instrumentace
- HPLC SCIEX ExionLC AD s kolónou Phenomenex Kinetic C18 (2.6 μm, 50 × 3 mm)
- MS SCIEX QTRAP 6500+ a Triple Quad 6500+
- Software Analyst 1.7 a MultiQuant 3.0
Hlavní výsledky a diskuse
Optimalizace přípravy ukázala, že 5 % CHAPS zdvojnásobuje návratnost IGF-1 oproti 1 %. Metoda dosáhla lineárního dynamického rozsahu 2–1000 ng/ml pro oba analyty, LOD 1 ng/ml a LOQ 2 ng/ml. Scheduled ionization úspěšně zabránila kontaminaci detektoru zbytkovým CHAPS. Pooled lidské sérum obsahovalo průměrně 119.4 ng/ml IGF-1 a 397.6 ng/ml IGF-2.
Přínosy a praktické využití metody
Nová workflow nabízí vysokou citlivost, rychlost a reprodukovatelnost pro bioanalytické aplikace. Díky minimální kontaminaci a jednoduché přípravě je vhodná pro rutinní sledování hormonů v klinických a výzkumných laboratořích.
Budoucí trendy a možnosti využití
Další rozšíření zahrnuje multiplexní analýzu několika proteinů současně a automatizaci přípravy vzorku. Potenciál se rýsuje v klinické diagnostice, monitoringu léčby a rozvoji personalizované medicíny.
Závěr
Popsaná MRM LC-MS/MS metoda s optimalizovanou přípravou vzorku a naplánovanou ionizací poskytuje spolehlivou a citlivou kvantifikaci IGF-1 a IGF-2 v séru. Workflow splňuje požadavky na rychlou a robustní analýzu velkých molekul v komplexních matricích.
Reference
- Cote L. et al Determination of insulin-like growth factor-1 in serum by HRAM LC/MS for clinical research, MSACL 2014
- Tanna N. et al LC-MS/MS quantification of intact insulin-like growth factor 1 in serum for clinical research, MSACL 2017
- Luo J. et al Quantitation analysis of human insulin-like growth factor 1 in serum by SPE-LC-MS/MS workflow, SCIEX Technical Note 2019
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
LC-MS/MS Quantification of Intact Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I) in Serum for Clinical Research
2017|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] LC-MS/MS Quantification of Intact Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I) in Serum for Clinical Research Nikunj Tanna, Mary Lame, Mark Wrona, and Erin Chambers Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ ■■ INTRODUCTION Direct quantification of…
Klíčová slova
igf, igfserum, seruminsulin, insulinintact, intactquantification, quantificationgrowth, growthspe, spefactor, factorlike, likearea, areahuman, humanoasis, oasisnote, noteppt, pptmouse
Quantitation Analysis of Human Insulin-like Growth Factor I (IGF1) in Serum by Using SPE-LC-MS/MS Workflow
2019|SCIEX|Aplikace
Quantitation Analysis of Human Insulin-like Growth Factor I (IGF1) in Serum by Using SPE-LC-MS/MS Workflow Featuring SCIEX Triple Quad TM 4500 and QTRAP® 4500 Systems Ji Luo1, Lihai Guo1, Wenhai Jin1, Lei Xiong2 1 SCIEX, China; 2SCIEX, USA Human insulin-like…
Klíčová slova
hormone, hormoneautocrine, autocrineparacrine, paracrinetheorical, theoricalgrowth, growthparameter, parameterquantification, quantificationmediating, mediatingvalue, valuesource, sourceplate, platepeptide, peptidesample, samplenormalize, normalizephase
High-Throughput Targeted Lipidomics Analysis of Dihydroceramide Desaturase-1 (DES1) Knockout Mice
2019|SCIEX|Aplikace
High-Throughput Targeted Lipidomics Analysis of Dihydroceramide Desaturase-1 (DES1) Knockout Mice Targeted Lipidomics on the QTRAP® 6500+ System Mackenzie Pearson1, Santosh Kapil Kumar Gorti1, Trevor S. Tippets2; Bhagirath Chaurasia2; Scott A. Summers2 1 SCIEX, USA; 2University of Utah, Dept of Nutrition…
Klíčová slova
lipid, lipiddihydroceramides, dihydroceramidestargeted, targetedmrm, mrmceramides, ceramidesadipose, adiposelipidomics, lipidomicschanges, changesscheduled, scheduledliver, liverknockout, knockoutmethod, methodlipids, lipidsbroad, broadbhe
Overview of LC-MS Quantitative Solutions for Biotherapeutic Analysis
2019|SCIEX|Ostatní
Overview of LC-MS Quantitative Solutions for Biotherapeutic Analysis Featuring SCIEX Instrumentation and Technologies Lei Xiong, Elliott Jones SCIEX, Redwood City, California, USA Figure 1. Summary of SCIEX Quantitative Solutions and Instrumentations to Solve Analytical Challenges in Biotherapeutic Industry. Darkest green…
Klíčová slova
sciex, sciexmrmhr, mrmhrworkflow, workflowmicrolc, microlcprotein, proteinquantification, quantificationmrm, mrmions, ionsswath, swathqtrap, qtrapquantitation, quantitationhrams, hramsspectrometers, spectrometersmobility, mobilityselexion
