Analysis of Olaquindox in Fodder Using SPE with LC/MS/MS

Význam tématu

Analýza reziduí veterinárních léčiv v krmivech je klíčová pro ochranu zdraví zvířat a zajištění bezpečnosti potravinového řetězce. Metoda stanovení olaquindoxu, který se používá jako růstový stimulátor a antimikrobiální látka, umožňuje efektivní monitorování jeho přítomnosti v krmivech a předchází potenciálním zdravotním rizikům.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem předložené studie bylo vyvinout a validovat citlivou a reprodukovatelnou kvantitativní metodu pro stanovení olaquindoxu v krmivu. Kombinace extrakce metanol-voda, čištění pevnou fází (SPE) a vysoce výkonné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC/MS/MS) poskytuje spolehlivý analytický postup vhodný pro rutinní použití.

Použitá metodika

• Odběr vzorku: 2 g homogenizovaného krmiva.
• Extrakce: 20 mL metanol/voda (5:95), vortex 1 min, třepání 45 min při 200 rpm za tmy, centrifugace 8 000 rpm 10 min.
• Čištění SPE: kazeta Bond Elut PPL (200 mg); kondicionace 2 mL metanol, equilibrace 2 mL vody; naložení 2 mL extraktu; třífázové promývání (0,02 mol/L HCl, 0,1 mol/L HCl, MeOH/voda 5:95); eluování 2 mL MeOH/voda (60:40).
• Filtrace eluátu nylonovým stříkačkovým filtrem.
• Analýza LC/MS/MS: MRM režim podle optimalizovaných podmínek.

Použitá instrumentace

• Kapalinový chromatograf: Agilent 1260 Infinity II LC systém.
• Tandemové hmotnostní spektrometrie: Agilent 6470 triple quadrupole s Jet Stream ESI ionizační hlavou.
• Kolona: Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18, 100×2,1 mm, 2,7 µm, 35 °C.
• Software pro akvizici a vyhodnocení dat: Agilent MassHunter.

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární rozsah: 25–1 000 ng/mL, koeficient korelace R² = 0,9962.
• Obnova: 78–92 % s RSD ≤ 3,6 % pro spiking hladiny 200, 400 a 1 000 µg/kg.
• Limit kvantifikace (LOQ): 200 µg/kg; limit detekce (LOD): 60 µg/kg.
• MRM chromatogramy pro standardy i matrixy prokázaly dobrou selektivitu a opakovatelnost retence.

Přínosy a praktické využití metody

• Spolehlivé stanovení olaquindoxu v různých typech krmiv (kuřecí, vepřové).
• Vysoká produktivita a reprodukovatelnost vhodná pro rutinní QA/QC laboratoře.
• Možnost rozšíření na další polaritově podobné analyty.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace automatizovaných extrakčních linek pro vyšší propustnost vzorků.
• Vývoj multi-reziduálních metod pro současné stanovení více terapeutik.
• Nasazení vysokorozlišovací MS pro rozšíření selektivity a identifikace neznámých metabolit.

Závěr

Popsaná metoda kombinující SPE s Agilent Bond Elut PPL a LC/MS/MS nabízí robustní, citlivé a přesné stanovení olaquindoxu v krmivech. Splňuje kritéria pro rutinní monitorování, zajišťuje vysoké recoveries, nízké limity detekce a spolehlivou reprodukovatelnost.