Determination of Nitrosamine impurities in Pregabalin drug substance using Triple Quadrupole Liquid Chromatography Mass Spectrometry

Význam tématu

Detekce nitrosaminů v léčivých látkách je kritická pro zajištění bezpečnosti pacientů a splnění globálních regulačních požadavků. Nitrosaminy patří mezi pravděpodobné karcinogeny, jejich přítomnost i v tracech může vést k preparátům nevhodným pro klinické použití. Po sérii stažení ARB léků se zaměřily agentury FDA a EMA na screening nitrosaminů i v jiných léčivech, včetně antiepileptika pregabalinu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentovaného postupu je vývoj a validace kvantitativní metody pro stanovení pěti nitrosaminových nečistot (NDMA, NDEA, NMAP, NPIP, NDBA) v aktivní farmaceutické látce pregabalinu. Metoda kombinuje kapalinovou chromatografii (UHPLC) s trojitou kvadrupólovou hmotnostní spektrometrií (LC/TQ MS) využívající APCI zdroj.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorek: 100 mg pregabalinu rozpuštěných v 5 mL vodomethanolického dilučního pufru (95:5), následuje vortex (2 min), třepání (450 rpm, 40 min), centrifugace (5000 rpm, 10 min) a filtrace 0,2 μm stříkačkovým filtrem.
• UHPLC: Agilent 1290 Infinity II systém s Poroshell HPH C18 kolonkou (3×150 mm, 4 μm), teplota 40 °C, průtok 0,5 mL/min, gradient od 5 % do 95 % methanolu s 0,2 % kyseliny mravenčí.
• MS/MS: Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS s APCI zdrojem, pozitivní ionizace, plynné podmínky (300 °C, 6 L/min), kapilára 3000 V, MRM přechody optimalizované pro každý analyzát.

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografické rozlišení: Pregabalin se účinně odděluje od pěti nitrosaminů, což minimalizuje kontaminaci MS.
• Lineární kalibrace v rozsahu 0,1–100 ng/mL pro všechny analyty s koeficientem regrese > 0,990.
• Reprodukovatelnost: RSD plochy < 2 % pro 7 replikací při koncentraci 1 ng/mL.
• Recovery studie při pěti úrovních (0,5–10 ng/mL) prokázaly návratnost 86–115 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je připravená pro sériovou kontrolu kvality pregabalinu v průmyslových podmínkách. Díky vysoké citlivosti, robustnosti a nízkému šumu APCI zdroje je vhodná pro rutinní stanovení a preventivní monitorování nitrosaminových nečistot.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu analyzovaných nitrosaminů či jiných toxických nečistot v různých farmaceutických látkách.
• Implementace vysokotlakých ionizačních technik (APPI, ESI) a HRMS pro zlepšení selektivity a citlivosti.
• Automatizace přípravy vzorků a online SPE před chromatografií pro zvýšení propustnosti analýz.

Závěr

Vyvinutá UHPLC–MS/MS metoda pro stanovení pěti nitrosaminů v pregabalinu prokázala vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost. Díky chromatografickému oddělení vysoké koncentrace API od stopových nečistot je proces spolehlivý pro rutinní QA/QC analýzy.

Reference

Mani C., Banerjee S., Vyas S. Determination of Nitrosamine Impurities in Pregabalin Drug Substance Using Triple Quadrupole LC/MS. ASMS 2020; Agilent Technologies, Inc. 2020.