Highly Sensitive LC-MS/MS Method for Simultaneous and Trace Level Quantification of Ten Nitrosamine Impurities in Olmesartan Medoxomil

Význam tématu

Detekce a kvantifikace nitrosaminů je zásadní z důvodu jejich prokázané genotoxické účinnosti a přísných regulačních limitů stanovených agenturami FDA a EMA. Po objevení kontaminace NDMA ve valsartanu v roce 2018 vzrostl zájem o vývoj vysoce citlivých a spolehlivých metod pro současné stanovení více nitrosaminů v léčivých látkách.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout a validovat jednoduchou, rychlou a vysoce citlivou metodiku LC-MS/MS pro simultánní stanovení deseti nitrosaminových nečistot (NDMA, NDEA, NMBA, NEIPA, NDIPA, NMPA, NMEA, NPIP, NPYR, NDBA) v léčivé látce olmesartan medoxomil, odpovídající požadavkům na nízké úrovně detekce a kvantifikace.

Použitá metodika a příprava vzorku

Vzorek olmesartanu (100 mg) byl extrahován 0,25 mL metanolu a 4,75 mL vody s 30min sonikací a následnou centrifugací. Supernatant se filtrováno 0,22μm PVDF stříkačkovým filtrem a injektovalo 20 μL.

Chromatografie probíhala na kolóně Poroshell HPH C18 (4,6×150 mm, 2,7 μm) při 40 °C, mobilní fáze A: 0,1 % formiové kyseliny ve vodě, B: 0,1 % formiové kyseliny v methanolu, gradient 5–90 % B za 14,5 min při průtoku 0,5 mL/min.

Hmotnostní spektrometrie na Agilent 6470 TQ s APCI pozitivním režimem: teplota plynu 300 °C, průtok 7 L/min, tlak nebulizéru 25 psi, peletizační napětí 4 000 V. Pro každou nitrosaminovou složku byly optimalizovány MRM přechody, kolizní energie a CAV parametry.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II vysokorychlostní pumpa (G7120A)
• Agilent 1290 Infinity II multisampler (G7167B)
• Agilent 1290 Infinity II multicolumn termostat (G7116B)
• Agilent 1290 Infinity II detektor s variabilní vlnovou délkou (G7114B)
• Agilent 6470 triple quadrupole LC/MS (G6470B)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje kvantifikačního LOQ 0,1 ng/mL (5 ppb) pro všechny analyty a lineární rozsah 0,1–10 ng/mL s koeficientem regresního vztahu nad 0,990. Reprodukovatelnost je pod 7 % RSD pro sedm replikací při 0,6 ng/mL. Obnova ve vzorcích olmesartanu se pohybovala mezi 82 a 110 % pro nižší (0,1 ng/mL) i vyšší (0,6 ng/mL) úroveň spikování. Chromatografická separace zajišťuje dostatečnou selektivitu proti matrici API.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda umožňuje rutinní kontrolu kvality olmesartanu medoxomilu v souladu s nejnovějšími doporučeními regulačních orgánů, nabízí vysokou propustnost, robustnost a snižuje časové i nákladové nároky na analýzu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metodiky na další ARB skupinu léčiv, přechod na vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrii pro screening neočekávaných nitrosaminů a automatizace přípravy vzorků představují perspektivní směry pro další zefektivnění analytického workflow.

Závěr

Prezentovaná LC-MS/MS metoda splňuje kritéria citlivosti, přesnosti a reprodukovatelnosti pro simultánní stanovení deseti nitrosaminů v olmesartanu medoxomilu. Metoda je připravena pro implementaci v rutinní QA/QC praxi s plným souladem s požadavky FDA a EMA.

Reference

1. FDA guidance document: Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (LC-HRMS) Method for the Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs
2. FDA guidance document: Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs
3. Determination of Nitrosamine Impurities Using the Ultivo Triple Quadrupole LC/MS, Agilent Technologies application note, publication number 5994-1383EN, 2019
4. Simultaneous Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS, Agilent Technologies application note, publication number 5994-2286EN, 2020