Nitrosamine Impurities Application Guide - Confidently Detect and Quantify Mutagenic Impurities in APIs and Drug Products

Význam tématu

Mutagenní nitrosaminové nečistoty, i ve stopových množstvích, mohou poškozovat DNA a zvyšovat riziko vzniku nádorových onemocnění. Jejich výskyt byl prokázán v léčivých substancích i hotových produktech, zejména u sartanské třídy antihypertenziv, ranitidinu či metforminu. Regulátoři (FDA, EMA, EDQM) proto požadují citlivé, validované metody pro detekci a kvantifikaci těchto karcinogenních sloučenin v koncentracích na úrovni jednotek až desítek ng·mL^–1.

Cíle a přehled studie

Účelem aplikace je předložit ucelené řešení založené na technologiích Agilent GC/MS/MS a LC/MS/MS pro analýzu nitrosaminů (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA, NMBA aj.) v aktivních farmaceutických substancích (API) a léčivých formách. Studie shrnuje metodiky pro sartanová léčiva (valsartan, losartan, candesartan, telmisartan, irbesartan, olmesartan), ranitidin, metformin a pregabalin, včetně přípravy vzorku, chromatografických podmínek, optimalizovaných MRM přechodů a systémové suitability.

Použitá metodika a instrumentace

• GC/MS/MS workflow: extrakce API/formulace do dichlormethanu s 50 ng·mL^–1 interní standard (NDMA-C¹³-D₆), separace na VF-WAXms kolónách, detekce na 5977B MSD nebo 7010B TQ, MRM přechody dle FDA metody.
• LC/MS/MS workflow: příprava vzorku v metanol-voda, chromatografie na Poroshell nebo Poroshell HPH-C18 kolónách s gradientem, detekce na 6470/6495/6490/6500/7010 TQ a Q-TOF, MRM optimalizace, diverter časování eluce API.

Použitá instrumentace

• Gas chromatograph Agilent 8890 s multimode inlet
• GC/MS detektory Agilent 5977B MSD a 7010B Triple Quadrupole
• LC systémy Agilent 1290 Infinity II
• LC/MS detektory Agilent 6470, 6495, 6490, 7010 Triple Quad a 6546 Q-TOF
• Chromatografické kolóny: J&W VF-WAXms, DB-WAX, InfinityLab Poroshell HPH-C18

Hlavní výsledky a diskuse

Metody dosahují LOQ 0,005–0,008 ppm (GC/MS/MS) a 0,001–0,05 ppm (LC/MS/MS), s lineární kalibrací R² ≥0,998 (GC) a ≥0,990 (LC). S/N ≥10 u LOQ standardů, RSD ≤5 % (GC) a ≤10 % (LC). Výsledné recovery v modelových testech API se pohybují mezi 86–117 % při různých úrovních spiknutí. Vzorky z reálného prostředí (API i tablety) prokázaly spolehlivou detekci NDMA a dalších nitrosaminů nad regulovanými limity nebo pod nimi (BLQ – pod kvantifikačním limitem).

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoce citlivá a selektivní analýza mutagenních nečistot na úrovni ppb.
• Rychlé zavedení do QC laboratoří díky ready-to-use metodám a RTL (Retention Time Locking).
• Široká kompatibilita s různými API a formulacemi bez nutnosti zásadních úprav metody.
• Automatizovaná příprava vzorků a jednoduché ovládání softwaru MassHunter.
• Plné splnění požadavků FDA, EMA a EDQM na screening i kvantifikaci nitrosaminů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření analyzovaných N-nitrosaminů díky HRMS a full-scan technikám.
• Online a in-line monitorování procesních vod ve výrobě API.
• Automatizované robotické přípravné systémy a toxikologické screeningy.
• Uplatnění v environmentální a potravinářské analytice pro sledování nitrosaminů v odpadních vodách či potravinách.

Závěr

Integrované GC/MS/MS a LC/MS/MS postupy Agilent poskytují robustní, validované a snadno implementovatelné řešení pro důkladnou analýzu nitrosaminových nečistot v API a finálních lécích. Metody splňují přísné regulační požadavky a nabízejí vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost.

Reference

• FDA Press Releases o nitrosaminech ve sartan-based a metformin-based lécích
• EMA a EDQM guidance documents on nitrosamine testing
• Agilent Application Guide, Publication No. 5994-2393EN, September 14, 2020