Simultaneous Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Metformin je široce používaný přípravek pro léčbu diabetu 2. typu. Z důvodu zjištění pravděpodobně karcinogenních nitrosaminů jako nečistot v léčivech vzniká nutnost vysoce citlivých analytických metod. Regulátoři, jako FDA, EMA či EDQM, požadují kontrolu stopových hladin těchto impurit, což klade nároky na technologii a validaci metod.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat LC/MS/MS metodu založenou na triple kvadrupólu Agilent 6470 pro současné stanovení osmi nitrosaminů v čisté látce metforminu. Metoda měla dosáhnout dostatečné selektivity, nízkých mezí detekce a kvantifikace a splnit požadavky regulačních limitů.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek metforminu se extrahoval v roztoku metanol–voda, injektováno bylo 20 µl. Chromatografie probíhala na Agilent 1290 Infinity II s kolonkou Poroshell HPH-C18 (4,6×150 mm, 2,7 µm), mobilní fáze obsahovala 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě a methanolu s gradientem při 0,5 ml/min. Detekce s APCI zdrojem v pozitivním módu na Agilent 6470 triple kvadrupólu umožnila sledování MRM přechodů pro NDMA, NDEA, NEIPA, NMBA, NDIPA, NMPA, NDPA a NDBA.
Instrumentace:

• Agilent 1290 Infinity II LC (pumpy, autosamplér, termostat, detektor)
• Agilent 6470 triple kvadrupólový LC/MS
• Reagencie LC/MS třídy (metanol, voda, kyselina mravenčí)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla limitů detekce v rozsahu 0,02 až 0,04 ng/ml a kvantifikace na 0,1 až 0,2 ng/ml. Linearita kalibrace (0,1–50 ng/ml) vykazovala R2 > 0,99 pro všechny cílové nitrosaminy. Reprodukovatelnost (%RSD) byla nižší než 6 %, přesnost v rozmezí 85–115 %. Obnova v matici metforminu při 0,6 ng/ml se pohybovala mezi 94 a 102 %. Chromatografické rozlišení bylo optimalizováno tak, aby izobarické a poziční izomery (např. NDIPA a NDPA) byly dostatečně rozlišené a aby byla minimalizována interference vysoké koncentrace metforminu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje laboratorím farmaceutické kontroly rychlé a spolehlivé vyhodnocení osmi regulovaných genotoxických nitrosaminů v metforminu. Díky vysoké citlivosti a selektivitě lze splnit přísné požadavky regulačních orgánů a podpořit bezpečnost léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metodiky na další aktiva a léčivé přípravky, integrace vysoce rozlišující hmotnostní spektrometrie (HRMS) pro potvrzování struktur nečistot a automatizace přípravy vzorků. Další výzvou je adaptace na vyšší throughput analytických platforem a miniaturizace odběru vzorků.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda na Agilent 6470 triple kvadrupólu prokázala vysokou citlivost, selektivitu i reprodukovatelnost při stanovení osmi nitrosaminů v metforminu. Splňuje regulační požadavky a nabízí robustní řešení pro QA/QC laboratoře.

Reference

• FDA announcement angiotensin II receptor blocker ARB recalls valsartan losartan
• FDA guidance Development and Validation of a RapidFire MS/MS Method for Screening of Nitrosamine Impurities
• FDA guidance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry Method for Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs
• FDA guidance LC-HRMS Method for Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Drug Substance and Product
• FDA press statement alerting patients and professionals nitrosamine impurities found in Metformin
• Agilent application note Determination of Nitrosamine Impurities Using the Ultivo Triple Quadrupole LC/MS, publication 5994-1383EN