Simultaneous Estimation of Eleven Nitrosamine Impurities in Metformin Drug Product Using an Agilent 6495D LC/TQ

Význam tématu

Analýza nitrosaminů v léčivých přípravcích je klíčová pro zajištění bezpečnosti dlouhodobé konzumace pacienty. Tyto sloučeniny jsou pravděpodobně mutagenní a byly zjištěny v některých farmaceutických produktech, zejména u metforminu. Regulátoři (FDA, EMA) proto stanovili přísné limity přijatelného denního příjmu (AI) a doporučují rutinní monitorování nitrosaminů metodami LC/MS/MS.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentované aplikace je vyvinout a validovat robustní analytickou metodu pro simultánní stanovení 11 nitrosaminových nečistot (NDMA, NMOR, NMBA, NPYR, NTHP, NDEA, NEIPA, NDIPA, NMPA, NMPEA a NDBA) v přípravku metforminu. Metoda má splňovat nároky na citlivost (LOD 5 pg/mL, LOQ 10 pg/mL), linearitu (1–100 ppb) i opakovatelnost (RSD < 5 %).

Použitá instrumentace

• Kapalinová chromatografie Agilent 1290 Infinity II (pumpa, autosampler, kolonová termostatická jednotka, diverter ventil).
• Analytická kolona Agilent Poroshell Phenylhexyl 150 × 3,0 mm, 2,7 µm.
• Hmotnostní spektrometr Agilent 6495D triple quadrupole s APCI zdrojem.
• Software Agilent MassHunter (acquisition, Qualitative a Quantitative Analysis, Optimizer).

Použitá metodika

Vzorky metforminu („immediate release“) extrahované metanolem a vodou, sonikace, centrifugace, filtrace PVDF 0,22 µm. Mobilní fáze: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě (A) a methanolu (B). Gradient 0–22 min od 100 % A do 90 % B. Detekce v režimu multiple reaction monitoring (MRM) s optimalizovanými tranzicemi a zdrojovými parametry (APCI, pozitivní ionizace). Proti-matryxová diverze (diverter) chrání MS před nadbytkem API.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity: R² > 0,999 pro rozsah 10–1 000 pg/mL (1–100 ppb).
• Citlivost: LOD 5 pg/mL (S/N ≥ 10), LOQ 10 pg/mL (S/N ≥ 20).
• Opakovatelnost: RSD < 5 % pro LOD, LOQ i 100 pg/mL (6 replikátů).
• Přesnost: recovery 80–120 % při 10 a 100 pg/mL (dvojí příprava, každá ve trojím opakování).
• Selektivita: potvrzení druhé kvantifikační/kwalifikační tranzice se stálým iontovým poměrem ±20 %.
• Rozlišení API a nitrosaminů zajištěno optimalizovanou kolonkou a gradientem.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a spolehlivou kontrolu nitrosaminů v metforminu s vysokou propustností vzorků. Díky standardizované instrumentaci a automatizaci workflow lze snadno nasadit v QA/QC laboratořích farmaceutických výroben k zajištění souladu s mezinárodními předpisy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metody na další léčivé formy (tablety, granule, suspenze) a jiné API. Integrace vysokopropustných platform (UHPLC-MS/MS) pro zvýšení počtu vzorků na směnu. Vývoj multiplexních metod pro simultánní stanovení dalších známých karcinogenů. Zlepšení zdrojové ionizace pro nižší LOD a robustnější analýzu komplexních matic.

Závěr

Prezentovaná metoda na Agilent 1290 Infinity II LC/6495D LC/TQ splňuje přísné požadavky na citlivost, linearitu, opakovatelnost a selektivitu pro simultánní stanovení 11 nitrosaminů v metforminu. Díky vysoké spolehlivosti a automatizaci je snadno aplikovatelná v rutině QA/QC a podporuje farmaceutické výrobce při dodržování globálních regulatorních norem.

Reference

• FDA Guidance for Industry. Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs. 2024.
• EMA Questions and Answers for Marketing Authorization Holders on Nitrosamine Impurities. 2020.
• ICH Q2(R2) Validation of Analytical Procedures. 2023.
• USP General Chapter. Quantitative Analysis of Nitrosamine Impurities by LC-MS. 2024.