Improved Peak Shapes for Basic Analytes Using Agilent InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 Columns - A comparison to traditional C18 columns with formic acid mobile phase for improved LC/MS sensitivity

Význam tématu

Zajištění ostrých a reprodukovatelných tvarů píků pro zásadité analyty je klíčové pro citlivou detekci v LC/MS analyzách. Tradiční C18 fáze často vykazují široké a špičaté píky při použití jednoduchých kyselých mobilních fází. InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 s nabitou povrchovou vrstvou představuje řešení pro zvýšení účinnosti a citlivosti při zachování jednoduché formicové kyseliny jako modifikátoru.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem studie bylo srovnání výkonnosti Agilent InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 proti tradiční superficially porous C18 koloně za použití jednoduché mobilní fáze s kyselinou formiovou. Dále byla ověřena možnost vylepšení tradiční C18 kolony pomocí pufrované mobilní fáze s amonným formiátem a dopad na citlivost v LC/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Analýza byla provedena na Agilent 1290 Infinity II LC systému spojeném s Agilent Ultivo triple kvadrupólovým LC/TQ detektorem. Mobilní fáze obsahovala vodu (A) a acetonitril (B) s 2 % kyselinou formiovou (C) nebo 200 mM amonným formiátem (pH 3). Gradientní eluce dosahovala 35–51 % B v čase 5 minut při průtoku 0,4 mL/min. Vzorky šesti farmaceutických zásaditých sloučenin (atenolol, pindolol, metoprolol, oxprenolol, labetalol, propranolol) byly připraveny v koncentracích 5 µg/mL a 50 ng/mL.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC systém (pumpa, degaser, autosampler, kolona termostat)
• Agilent Ultivo LC/TQ s Agilent Jet Stream ESI zdrojem
• InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 2,1×100 mm, 2,7 µm a tradiční C18 superficially porous 2,1×100 mm, 2,7 µm
• Diodová array detektor Agilent 1290 Infinity II DAD

Hlavní výsledky a diskuse

InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 poskytla užší a symetričtější píky pro všechny analyty s formicovou kyselinou v mobilní fázi, čímž zvýšila citlivost a poměr signál/šum až o 200–500 % ve srovnání s tradiční C18 kolónou. Tradiční C18 kolona vykázala širší píky se zhoršenou citlivostí, kterou bylo možné částečně kompenzovat přidáním amonného formiátu, avšak za cenu potlačení iontů a snížení signálu v LC/MS detekci.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá mobilní fáze s formiovou kyselinou zajišťuje vysokou reprodukovatelnost a přenositelnost metod mezi laboratořemi
• Vyšší citlivost a lepší geometrie píků usnadňují kvantifikaci při nízkých koncentracích
• Nižší tlak a úspora času díky superficially porous částicím o velikosti 2,7 µm

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití nabitých povrchových kolón v biofarmaceutickém výzkumu, v analýzách komplexních matric a při vývoji metod pro vysoko-výkonnou a miniaturizovanou chromatografii. Další směřování zahrnuje optimalizaci ekologických solventů a integraci s vysokorychlostními hmotnostními spektrometry nových generací.

Závěr

Charged surface InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 kolona ve spojení s jednoduchou formicovou kyselinou jako mobilní fází představuje efektivní nástroj pro analýzu zásaditých farmaceutik, zvyšuje citlivost LC/MS a přináší lepší rozlišení píku oproti tradičním C18 kolónám.

Reference

1. Gratzfield-Hugsen A, Naegele E. Maximizing Efficiency Using Agilent InfinityLab Poroshell 120 Columns. Agilent Technologies Application Note 5990-5602EN (2016).
2. Meyer VR. Practical High-Performance Liquid Chromatography. 4th edition, Wiley (2004), p. 34.