Improve performance for basic analytes with low ionic strength mobile phases

Význam tématu

Vynikající tvar chromatografických špiček u zásaditých sloučenin je klíčový pro přesnou kvantifikaci v HPLC a LC/MS aplikacích. Nízká iontová síla mobilní fáze, například s použitím pouze kyseliny mravenčí, výrazně zjednodušuje přípravu vzorků a přispívá k lepší reprodukovatelnosti metod. InfiniteLab Poroshell 120 CS-C18 kolony nabízejí řešení pro zlepšení tvaru špiček a zvýšení výkonu bez nutnosti použití složitých pufrovacích systémů.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na srovnání chromatografických vlastností InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 kolony se standardními C18 kolunami při mobilních fázích s nízkou iontovou silou (kyselina mravenčí) a při použití pufrů (ammonium formát). Hlavním cílem bylo ukázat:

• zlepšení tvaru a ostrosti špiček zásaditých analyzovaných látek,
• udržení citlivosti v LC/MS detekci,
• širší robustnost metody při přenosu mezi systémy HPLC/UHPLC.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separace byla využita kolona InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 (2,7 μm Superficially porous particle) v rozměrech 2,1×50 mm až 4,6×150 mm včetně PEEK-lined variant pro citlivé kovové sloučeniny. Jako mobilní fáze posloužila kyselina mravenčí (nízká iontová síla) a pro srovnání ammonium formátový pufr. Analytickým systémem byl Agilent InfinityLab LC spojený s hmotnostním spektrometrem v režimu ESI.

Hlavní výsledky a diskuse

Poroshell 120 CS-C18 prokázala u zásaditých analytů lepší tvar špiček a menší šířku na půl výšky než tradiční C18 kolona při použití kyseliny mravenčí. Při vysoké zátěži vzorku byla zachována separační kapacita, což ulehčuje analýzu vzorků s vyšší koncentrací analyzovaných látek.
V LC/MS detekci dosáhla kolona s kyselinou mravenčí SNR ~312 pro metoprolol, zatímco tradiční C18 s ammonium formátem dosáhla pouze SNR ~83 kvůli potlačení ionizace. Nízká back-pressure (~50 %) umožňuje snadný přechod mezi HPLC a UHPLC systémy, aniž by byla ohrožena rychlost nebo rozlišení.

Přínosy a praktické využití metody

Výsledná metoda nabízí:

• jednodušší přípravu mobilní fáze bez složitých pufrů,
• vynikající opakovatelnost a robustnost,
• kompatibilitu s LC/MS aplikacemi pro zásadité analyty,
• redukci provozních nákladů díky nižšímu back-pressure a delší životnosti kolony.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se, že povrchově porézní materiály jako Poroshell 120 CS-C18 budou stále více využívány v ultrarychlých aplikacích (UHPLC) a v online spojení s hmotnostní spektrometrií. Další vývoj směřuje k optimalizaci povrchových modifikací pro ještě vyšší pH stabilitu a selektivitu vůči různým skupinám sloučenin. Technologie PEEK-lined kol umožní šetrnější analýzu kovově citlivých molekul.

Závěr

InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 nabízí výrazné zlepšení separační výkonnosti pro zásadité analyty při použití nízké iontové síly mobilní fáze. Metoda přináší vynikající tvar špiček, zvýšenou citlivost v LC/MS a nižší tlakové ztráty, což podporuje rychlý a efektivní přenos metod mezi HPLC a UHPLC platformami.

Reference

• Application Note 5994-2094EN, Agilent Technologies, 2020
• Application Note 5994-2720EN, Agilent Technologies, 2020