Superior Sample Capacity for Basic Compounds with a Formic Acid Mobile Phase - A comparison of the Agilent InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 to traditional C18 columns

Význam tématu

Formiová kyselina ve spojení s C18 chromatografií představuje jednoduchou a vysoce reprodukovatelnou mobilní fázi pro rozdělení základních farmaceutických sloučenin. Tradiční C18 kolony však často vykazují široké a deformované píky, které vyžadují přídavek trifluoroctové kyseliny s rizikem potlačení signálu v MS a kontaminace systému.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat Agilent InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 s konvenčními C18 kolonami na bázi povrchově porézních částic při analýze šesti základních léčiv (doxepin, desipramin, imipramin, nortriptylin, amitriptylin, trimipramin) za použití izokratické formiové kyseliny a acetonitrilu. Hodnocen byl tvar píku, nosnost vzorku a citlivost na stopové nečistoty pomocí UV a triple-quadrupole MS detekce.

Použitá metodika a instrumentace

Ukázalo se, že CS-C18 kolona pracuje při průtoku 0,4 ml/min v izokratickém režimu s formiovou kyselinou (2 %) a acetonitrilem, zatímco tradiční C18 kolony byly testovány též s trifluoroctovou kyselinou pro srovnání. Systém Agilent 1290 Infinity II LC byl modifikován pro nízkou disperzi a spojen s Ultivo LC/TQ a diodovým polem. Analyty byly připraveny ve vodném roztoku a sledovány při 254 nm nebo v dMRM režimu.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC: flexibilní pumpa, degaser, integrovaná kolonnová komora
• Agilent Ultivo triple quadrupole LC/MS s ESI zdrojem a Max-Light cartrige flow cell
• Agilent 1290 Infinity II diode array detector, UV detekce při 254 nm
• InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 2.1×100 mm, 2.7 μm
• Tradiční superficially porous C18 kolona 2.1×100 mm, 2.7 μm a totally porous C18 2.1×100 mm, 1.7 μm
• Mobilní fáze: voda, acetonitril, formiová a trifluoroctová kyselina

Hlavní výsledky a diskuse

CS-C18 kolona vykázala ostřejší a vyšší píky než tradiční C18 v rámci stejného složení formiové kyseliny, se zkrácenou šířkou píku až o 20 %. U tradiční C18 bylo nutné přidat trifluoroctovou kyselinu, což způsobovalo výraznou iontovou supresi a špatnou čistitelnost systému. CS-C18 dále udržela úzké píky i při zatížení amitriptylinu až 500 ng, což umožnilo spolehlivou detekci nečistot na úrovni 0,25 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Zlepšený tvar píku u základních sloučenin bez potřeby trifluoroctové kyseliny
• Větší kapacita nosnosti pro analýzu stopových nečistot
• Kompatibilita s LC i LC/MS detekcí bez rizika kontaminace
• Úspora času na údržbu a čištění chromatografu

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření povrchově nabitých fází na další třídy látek, optimalizace mobilních fází s nízkou iontovou silou a přechod na menší částice pro vyšší rychlost a citlivost. Integrace s vysoce rozlišujícími MS systémy a automatizovanými platformami pak umožní další zefektivnění farmaceutické kontroly kvality a výzkumu.

Závěr

InfinityLab Poroshell 120 CS-C18 kolona představuje robustní a univerzální řešení pro separaci základních farmaceutických sloučenin ve formiové kyselině, překonává tradiční C18 v tvaru píku, nosnosti a citlivosti a eliminuje nevýhody spojené s trifluoroctovou kyselinou.

Reference

1. Gratzfield-Hugsen A Naegele E Maximizing Efficiency Using Agilent InfinityLab Poroshell 120 Columns Agilent Technologies application note 5990-5602EN 2016
2. Meyer VR Practical High-Performance Liquid Chromatography Fourth Edition Wiley 2004 str 34