Determination of Nitrosamine Impurities Using the Ultivo Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Detekce nitrosaminových nečistot v léčivech, zejména v ARB (blokátorech receptoru pro angiotensin II), je zásadní vzhledem k jejich potenciálnímu karcinogennímu a genotoxickému působení. Početné zpětné stahy sartanových léčiv zdůraznily nutnost vysoce citlivých a spolehlivých analytických metod pro kontrolu stopových hladin těchto nečistot.

Cíle a přehled studie

Studie představuje novou metodiku založenou na Agilent Ultivo LC/TQ pro současné stanovení 12 nitrosaminů, včetně šesti regulatorně sledovaných a šesti dalším možným mutagenům. Cílem je dosáhnout nízkých detekčních a kvantifikačních limitů, splňujících požadavky FDA a EMA.

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC Agilent 1290 Infinity II se sloupcem Poroshell HPH C18 (2,1×100 mm, 1,9 µm), teplota 40 °C, tok 0,4 mL/min.
• Gradientní eluce od 1 % do 95 % methanolu s 0,2 % kyseliny mravenčí ve vodě.
• Detekce APCI v pozitivním režimu na Agilent Ultivo triple kvadrupólu v režimu dynamického MRM.
• Optimalizace přechodových iontů, fragmentorů a kolizních energií pomocí MassHunter Acquisition Optimizeru.

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární rozsah kalibrace pro všechny analyty 0,05–100 ng/mL, koeficient determinace R2 > 0,996.
• Detekční limity (LOD) mezi 0,025 a 0,1 ng/mL, kvantifikační limity (LOQ) 0,05–0,15 ng/mL.
• Poměr signálu a šumu (S/N) vyšší než 7–50, resp. 12–323 při LOQ, zajišťující vynikající citlivost.
• Přesnost 80–120 % a opakovatelnost (CV) < 15 % napříč třemi koncentracemi (n = 3).
• Příklad překrytého chromatogramu ukázal čistou separaci všech 12 sloučenin do 6 min aprobačního běhu.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý a robustní protokol pro rutinní QA/QC laboratoře ve farmaceutickém průmyslu.
• Možnost adaptace na různé formulace ARB léčiv pouhými úpravami chromatografického separačního gradientu.
• Vysoká propustnost analýz a minimalizace meziproduktu zátěže iontového zdroje díky APCI.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace HRMS pro rozšíření spektra sledovaných nečistot a izomerů.
• Automatizovaná příprava vzorků a miniaturizace, včetně mikrofast protekčních systémů.
• Multiplexní metody pro současné stanovení nitrosaminů v potravinách, vodách a životním prostředí.

Závěr

Metoda Ultivo LC/TQ poskytuje vysoce citlivé, přesné a reprodukovatelné stanovení nitrosaminových nečistot na úrovni desítek pikogramů. Splňuje regulatorní požadavky a nabízí flexibilitu pro kontrolu různých farmaceutických matric.

Reference

1. FDA recall updates and press announcements – angiotensin II receptor blocker (ARB) recalls Valsartan, Losartan.
2. FDA guidance document: Development and validation of a RapidFire-MS/MS method for screening of nitrosamine impurities.
3. FDA guidance document: Liquid chromatography–high resolution mass spectrometry (LC–HRMS) method for the determination of six nitrosamine impurities in ARB drugs.