Determination of Nitrosamine Impurities Using the High-Resolution Agilent 6546 LC/Q-TOF

Význam tématu

Nitrosaminy představují pravděpodobné karcinogeny, které se mohou v malých množstvích vnášet do finálních farmaceutických produktů jako vedlejší produkty výroby. Objevení těchto látek v přípravcích typu ARB (blokátory receptoru angiotensinu II) vedlo k hromadným odvoláním léků a zvýšenému tlaku regulačních orgánů na zavedení spolehlivých analytických metod pro jejich stanovení.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit vysoce citlivou metodu založenou na kapalinové chromatografii spojené s vysokým rozlišením hmotnostní spektrometrie (LC/Q-TOF) pro současné stanovení až 11 nitrosaminových nečistot v přípravcích ARB. Metoda se zaměřuje na šest látek definovaných US FDA a rozšiřuje detekční schopnosti na dalších pět relevantních sloučenin.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky se připravují jednoduchým ředěním a přímou injekcí do chromatografu. Metoda využívá:

• UHPLC systém Agilent 1290 Infinity II (pumpa, multisampler, termostat)
• Analytický sloupec Poroshell HPH C18 (2,1 × 100 mm, 1,9 µm)
• Gradientní eluce (0,2 % kyseliny mravenčí ve vodě / methanol, 0,4 ml/min, doba analýzy 10 min)
• Agilent 6546 LC/Q-TOF s APCI v pozitivním módu
• Rozsah detekce m/z 70–170, teplota zdroje 300 °C, APCI hořák 350 °C

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje limitu detekce v rozmezí 0,05–0,25 ng/ml a limitu kvantifikace 0,1–0,5 ng/ml pro všechny analyty. Kalibrační křivky vykazují vynikající linearitu (R2 > 0,996) v rozsahu až 0,05–100 ng/ml s náběhem 1/x vážené lineární regrese. Přesnost stanovení se pohybuje mezi 80 a 110 % očekávané hodnoty a reprodukovatelnost (CV) je nižší než 15 %.

Přínosy a praktické využití metody

Propracovaná metoda umožňuje rychlé a spolehlivé sledování karcinogenních nitrosaminů v lékových formách ARB. Díky krátké době analýzy a vysokému rozlišení lze snadno integrovat do rutinní QA/QC laboratoře pro kontrolu kvality surovin i hotových produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na další třídy farmaceutických preparátů a drobné molekuly. Perspektivní je automatizace vzorkové přípravy, nasazení vyšších rozlišení hmotnostních analyzátorů a využití strojového učení pro pokročilou identifikaci neznámých nitrosaminů.

Závěr

Vyvinutá metoda LC/Q-TOF pro stanovení nitrosaminů nabízí vysokou citlivost, spolehlivost a flexibilitu pro analytickou kontrolu ARB přípravků. Je připravena k implementaci v rutinním provozu a splňuje požadavky regulačních organizací.

Reference

1. USFDA: Vývoj a validace metody RapidFire–MS/MS pro screening nitrosaminových nečistot.
2. USFDA: LC/HRMS metoda pro stanovení šesti nitrosaminových nečistot v ARB lécích.