Highly sensitive method for the determination of 12 nitrosamine impurities in multiple ARBs, the class of sartan drug formulations

Význam tématu

Angiotenzin II receptor blokátory (ARB) se široce používají k léčbě hypertenze, srdečního selhání a onemocnění ledvin. Během syntézy sartanových léčiv se mohou tvořit nitrosaminy, potenciálně karcinogenní nečistoty. Zvýšené nálezy NDMA, NDEA a dalších nitrosaminů vedly k masovým stažením ARB preparátů z trhu a zpřísnění regulačních požadavků FDA a EMEA.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout jedinou LC-MS/MS metodu pro citlivou kvantifikaci 12 nitrosaminů ve třech ARB substancích (olmesartan, irbesartan, valsartan). Metoda byla validována podle ICH Q2(R2), FDA a EMEA směrnic, aby splňovala požadavky na LOD/LOQ a reprodukovatelnost.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky se připravovaly ředěním API na koncentraci 50 mg/mL, následovala centrifugace a filtrace PVDF 0,22 μm. Chromatografie se provádí na kolonce Acclaim 120 C18 (4,6×250 mm, 5 μm) v gradientním módu (40 minut) s mobilní fázi 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě/methanolu. Detekce APCI-MS/MS v režimu SRM zajišťuje vysokou citlivost a selektivitu.

• UHPLC Vanquish Flex s C18 kolonkou Acclaim 120
• TSQ Altis Plus Triple Quadrupole MS s APCI
• Chromeleon CDS pro zpracování dat
• Infuzní pumpa, diverzní ventil, PVDF filtry, laboratorní centrifuga

Hlavní výsledky a diskuse

LOQ metody dosahuje 0,15 ng/mL pro všechny analyty, LOD 0,0375–0,075 ng/mL. Linearity v rozsahu 0,15–20 ng/mL (R²>0,999). Systémová variabilita %RSD <5 %, robustnost potvrzena sekvenčním během po 41 h (<8 % RSD). Recovery ve třech úrovních (0,15; 1,5; 20 ng/mL) pro všechny ARB v rozmezí 70–130 %. Výborné chromatografické rozlišení mezi 12 nitrosaminy a API.

Přínosy a praktické využití metody

• Jedna metoda pro 12 nitrosaminů ve třech ARB
• Sub-ppb citlivost a vysoká reprodukovatelnost
• Krátký runtime 40 minut pro vysokou propustnost
• Plná shoda s regulatorními požadavky a auditní stopou

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na další aktivní farmaceutické látky a biologické přípravky
• Integrace s vysokorozlišovacími MS (HRMS) pro identifikaci nových nečistot
• Automatizace přípravy vzorků a využití zelených chromatografických metod
• Studium konformačních izomerů nitrosaminů a jejich chromatografických vlastností

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda pro analýzu 12 nitrosaminů v ARB substancích ukázala vynikající citlivost, linearitu a robustnost. Metoda splňuje současné i zpřísněné požadavky FDA, EMEA a ICH, nabízí rychlý a spolehlivý screening k zajištění bezpečnosti a kvality farmaceutických produktů.

Reference

1. Drugs.com: Angiotensin receptor blockers (angiotensin II inhibitors).
2. EMA: Referral for sartans containing a tetrazole group.
3. FDA Guidance – Control of Nitrosamine impurities in human drugs (2018).
4. FDA: Search list of recalled ARBs including valsartan, losartan and irbesartan.
5. FDA: Recommended acceptable intake limits for nitrosamine NDSRIs.
6. EMA: Questions and Answers on nitrosamines (Article 5(3), Oct 2023).
7. ICH Q2(R2): Validation of analytical procedures.
8. FDA: LC-HRMS Method for six nitrosamine impurities in ARB drugs.