Transfer of an EP method for mebendazole from a Waters Acquity UPLC system to a Vanquish Horizon UHPLC system

Význam tématu

Transfer chromatografických metod mezi různými přístroji je zásadní pro konzistentní výsledek v regulovaných laboratořích. Správná instrument-to-instrument validace zajišťuje srovnatelnou kvalitu, minimalizuje riziko nekompatibility a umožňuje efektivní využití moderních UHPLC platforem bez ztráty výkonu.

Cíle a přehled studie

• Ukázat přenos monografické EP HPLC metody pro analýzu nečistot mebendazolu ze systému Waters Acquity UPLC na Thermo Scientific Vanquish Horizon UHPLC.
• Vyhodnotit rozdíly v chromatografických parametrech a navrhnout kompenzační opatření, zejména v oblasti termostatování kolony.
• Optimalizovat metodu pro rychlé UHPLC podmínky s významnou úsporou času a eluentu.

Použitá metodika a instrumentace

• Waters Acquity UPLC: pumpa Binary Solvent Manager, autosampler Sample Manager (10 µL smyčka), High Temperature Column Heater, Tunable UV detektor (10 mm/500 nL), Chromeleon CDS 7.2.9.
• Thermo Scientific Vanquish Horizon UHPLC: Binary Pump H (VH-P10-A), Split Sampler HT (VH-A-10-A) se smyčkou 25 µL nebo 10 µL, Column Compartment H (VH-C10-A), Variable Wavelength Detector F (VF-D40-A) s flow cell 7 mm/2,5 µL, Chromeleon CDS 7.2.9.
• Kolony Hypersil GOLD C18 3 µm 4,6×100 mm pro HPLC a 1,9 µm 2,1×50 mm pro UHPLC.
• Mobilní fáze A: 7,5 g/L acetát amonný ve vodě; B: acetonitril; gradient od 20 % B k 90 % B dle EP monografie.
• Teplota kolony 40 °C, pasivní preheating u Acquity, aktivní u Vanquish; autosampler 10 °C; injekční objem 5 µL (HPLC), 1 µL (UHPLC).

Hlavní výsledky a diskuse

První přenos za podmínek EP monografie ukázal výbornou shodu relativních retenčních časů a ploch (RSD area ≤ 0,4 %), ale absolutní časy na Vanquish byly o 4–7 % kratší. Ukázalo se, že rozdíly v efektivní teplotě kolony a předohřevu eluentu vedou k dřívějšímu elučnímu času. Nastavením kolony a preheateru Vanquish na ≈ 35 °C bylo dosaženo rozdílů < 0,5 % v retenčních časech. Při down-scaling k UHPLC podmínkám se zachovalo rozlišení > 2,3, RSD ploch < 0,5 % a signál-šum srovnatelný v obou systémech. Metoda UHPLC přinesla 90 % úsporu eluentu a 84 % zkrácení doby analýzy.

Přínosy a praktické využití metody

• Zajištění konzistence farmakopeálních metod mezi různými přístroji.
• S výraznou úsporou času a eluentu při přechodu na UHPLC.
• Možnost rychlé implementace v QC a výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizované nástroje pro výpočet a kalibraci GDV a termostatických podmínek.
• Rozšíření přenosu na další farmakopeální metody a multidimenzionální chromatografii.
• Zavádění zelené chemie a digitálních řešení pro virtuální validaci metod.

Závěr

Metodu EP pro analýzu nečistot mebendazolu lze úspěšně přenést z Acquity UPLC na Vanquish Horizon UHPLC s minimálními úpravami termostatování. Optimalizovaný UHPLC protokol významně šetří čas i spotřebu eluentu, aniž by docházelo ke snížení chromatografického výkonu.

Reference

1. Swartz M.E.; Krull I. Analytical Method Transfer; LCGC North America, 2006.
2. Ermer J.; Limberger M.; Lis K.; Wätzig H. J. Pharm. Biomed. Anal. 2013, 85, 262–276.
3. Paul C.; Grübner M. Thermo Scientific White Paper 72711, 2018.
4. Grübner M.; Paul C.; Steiner F. Thermo Scientific App. Note 72716, 2018.
5. Grübner M.; Paul C.; Steiner F. Thermo Scientific App. Note 72717, 2018.
6. European Pharmacopoeia 9.5, monograph 0845: Mebendazole, 2018.
7. WHO Model List of Essential Medicines, 20th ed., 2017.
8. United States Pharmacopeia USP41-NF36, monograph Mebendazole, 2018.
9. European Pharmacopoeia, Chapter 2.2.46 Chromatographic Separation Techniques, 2018.
10. Thermo Fisher HPLC method transfer calculator, 2019.
11. European Pharmacopoeia: < 2.2.46 >, 2018.
12. United States Pharmacopeia <621> Chromatography, 2018.