Successful and Stress-Free LC Method Transfers

Transfer ep monografie chlorhexidinu z Waters Alliance na Vanquish Core HC­PLC systém

Význam tématu

Přenesení farmakopejní metody HPLC mezi různými přístroji je klíčové pro zajištění konzistence výsledků mezi laboratořemi i při modernizaci instrumentace. Standardní metody CP (kompendiální) často nepovolují změny chromatografických podmínek, a proto je nezbytné nalézt techniky, které umožní udržet validitu metody bez zásahu do gradientu, složení eluentu či kolonové fáze.

Cíle a přehled aplikace

Cílem bylo demonstrovat hladký přenos monografie EP pro analýzu chlorhexidinu diglukonátu z Waters Alliance HPLC systému na Vanquish Core HPLC systém, s důrazem na zachování rel. retenční časy, rel. plochy píků, a případné zlepšení parametrů kvality píků, zejména rozlišení a opakovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

• Kolona: Hypersil GOLD C18, 4,6 × 250 mm, 5 µm
• Mobilní fáze: A 0,1 % TFA (80 % voda/20 % ACN), B 0,1 % TFA (10 % voda/90 % ACN)
• Gradient: 0–2 min 0 % B, 2–32 min lineárně 0→20 % B, 32–37 min 20 % B, 37–47 min 20→30 % B, 47–54 min 30 % B, 54–55 min 30→0 % B, 55–62 min 0 % B
• Rtok: 1,0 mL/min, 30 °C, detekce 254 nm
• Řídicí software: Chromeleon 7.3

Hlavní výsledky a diskuse

1) Relativní retenční časy (RRT) všech píků mezi systémy souhlasily s hodnotami EP monografie (odchylky < 0,02).
2) Relativní plocha píků vůči hlavnímu píku (chlorhexidinu) se pohybovala v toleranci ± 5 % u obou systémů.
3) Rozlišení (R) kritických párů bylo na Vanquish Core vyšší než na Alliance:
– pár Impurity F/G: R Alliance = 2,1 vs R Vanquish = 2,5 (+ 19 %)
– pár Impurity H/I: R Alliance = 1,7 vs R Vanquish = 1,9 (+ 12 %)
4) Vanquish Core vykázal lepší opakovatelnost ploch píků (RSD < 0,5 % vs až 0,8 % na Alliance).

Přínosy a praktické využití metody

Demonstrace přenositelnosti metody bez změny chromatografických podmínek potvrdila, že Vanquish Core HPLC systém umožňuje provoz metod EP s lepší reprodukovatelností a vyššími hodnotami rozlišení. Laboratoře tak mohou bez rozsáhlého převalidačního úsilí využít jednotný postup na moderních systémech.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření přenosu do dalších farmakopejních metod zejména gradientních.
• Automatické porovnání SST výsledků mezi přístroji v rámci softwaru.
• Kombinace s automatizovaným laděním pumpních a předkolonových objemů pro další zvýšení přenositelnosti.

Závěr

Přenesení EP metody pro chlorhexidin z Waters Alliance HPLC na Vanquish Core HPLC systém proběhlo úspěšně bez závažných úprav metody, přičemž Vanquish Core nabídl vyšší rozlišení, menší desvílky ploch a lepší efektivitu píků. Tento postup dokládá schopnost laboratoří modernizovat vybavení a udržet konzistentní kvalitu analýzy.

Reference

1) European Pharmacopoeia Monograph 0845 „Chlorhexidine gluconate“; EP 10.0, 2019.
2) Bown, J. H. The Theory and Practice of HPLC Method Transfer. J. Chrom. A 2019, 1585, 28–35.
3) Neue, U. D. Method Transfers in Liquid Chromatography. J. Chrom. A 2015, 1425, 139–153.
4) Poole, C. F.; Poole, S. K. A Perspective on Current LCGC Method Transfers. LC–GC Europe 2011, 24, 330–336.
5) Method Transfer Guidelines. The United States Pharmacopeia 39, NF 34, 2016.
6) Davis, K. L. Avoiding Pitfalls in HPLC–UHPLC Method Transfers. LCGC North America 2014, 32, 318–327.
7) Q2A Analy­sis of Method Transfer in Pharmaceutical Analysis. ICH Harmonised Tripartite Guideline, 2005.
8) Guillarme, D.; Rudaz, S.; Veuthey, J.-L. From HPLC to UHPLC: Is the Grass Greener on the Other Side ? LCGC North America 2008, 26, 32–42.
9) EP chlorhexidine SST leaflet, batch 2, Y00015458, EDQM, Strasbourg, 2018.