Analysis of Cyclosporine, Everolimus, Sirolimus, and Tacrolimus in Whole Blood for Clinical Research

Význam tématu

Imunosupresiva cyklosporin, everolimus, sirolimus a takrolimus představují klíčové léky v transplantologii a léčbě autoimunitních onemocnění. Díky značné intra‐ i interindividuální variabilitě farmakokinetiky a farmakodynamiky je nutná přesná a citlivá kvantifikace hladin těchto látek v krevním vzorku.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout rychlou, spolehlivou a ekonomickou metodiku pro simultánní stanovení cyklosporinu, everolimu, sirolimu a takrolimu v celém krevním vzorku vhodnou pro klinický výzkum. Studie zkoumala linearitu, přesnost, opakovatelnost, matrix efekty, potencialitu interferencí a shodu s externím QA schématem.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC I-Class System (FTN)
• ACQUITY UPLC HSS C18 SB Column, 1,8 μm, 2,1 × 30 mm
• Xevo TQD tandemový kvadrupólový hmotnostní spektrometr
• Software MassLynx v4.1 s TargetLynx Application Manager

Použitá metodika

Vzorky celkové krve byly připraveny precipitací bílkovin ve vodném roztoku ZnSO4 a přidáním interních standardů (ascomycin, deuterované analoga). Použitý objem vzorku činil 50 µl. Chromatografie probíhala gradientní elucí na kolonce HSS C18 při 55 °C s rychlou běžnou dobou analýzy 1,8 minuty. Detekce pomocí MRM režimu v pozitivní ESI ionizaci.

Hlavní výsledky a diskuse

• Citlivost metody dovoluje kvantifikaci při koncentracích nižších než 8 ng/ml (cyklosporin) a 0,5–1 ng/ml (ostatní analyty) s přesností RSD <20 % a bias <15 %.
• Celková přesnost i opakovatelnost vzorků (n=25) vykázaly RSD ≤9,1 % napříč QC hladinami.
• Lineární oblast stanovení pokrývá ~0,7–1662 ng/ml v závislosti na analytech.
• Žádné systémové carry-over ani významné matricové efekty po kompenzaci interním standardem.
• Interferenční testy s endogenními látkami a dalšími imunosupresivy potvrdily vhodnost metody.
• Porovnání s NEQAS vzorky prokázalo průměrné odchylky v rozmezí −11,9 % až +1,6 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální spotřeba vzorku (50 µl) a rychlá příprava umožňují vysokou propustnost laboratoře.
• Vysoká selektivita a citlivost podporuje výzkum farmakokinetiky, terapeutického monitorování i vývoj nových léčiv.
• Metoda je vhodná pro klinické studie a externí kontrolu kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace automatizované přípravy vzorků a online vzorkovačů pro zvýšení efektivity.
• Rozšíření panelu o další imunosupresiva a metabolity pro komplexnější prognózy účinku.
• Využití high-resolution MS pro lepší charakterizaci metabolitů a nepotvrzených interferentů.
• Adaptace metodiky pro bod-of-care testování s rychlými IMS nebo mikrofluidními platformami.

Závěr

Navržená UPLC-MS/MS metoda pro kvantifikaci čtyř imunosupresiv v celkové krvi nabízí rychlý, robustní a ekonomický přístup s vynikající přesností, citlivostí a linearitou. Vysoká shoda s externím schématem potvrzuje její spolehlivost pro klinický výzkum a monitorování léčby.

Reference

1. Seger C et al. Ther Drug Monit. 2016;38:170–189.