Simultaneous Analysis of Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus, and Cyclosporin A in Whole Blood Using the Agilent RapidFire High-Throughput Mass Spectrometry System

Význam tématu

V klinických laboratořích je přesné a spolehlivé stanovení imunosupresivních léčiv (tacrolimus, sirolimus, everolimus a cyklosporin A) v celém krevním vzorku klíčové pro optimalizaci dávkování a prevenci toxických reakcí.
Rostoucí počet vzorků a potřeba rychlého vyhodnocení chromatografických metod vedou k zájmu o technologie zkracující analytický čas bez kompromisů na citlivosti a selektivitě.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo ověřit použití systému Agilent RapidFire High-Throughput Mass Spectrometry pro simultánní měření čtyř imunosupresivních látek v celkové krvi.
Studie hodnotila:

• Rychlost analýzy (méně než 13 s na vzorek).
• Lineární rozsahy, limity stanovení (LOQ) a reprodukovatelnost.
• Porovnání výsledků s konvenčními LC/MS metodami.

Použitá instrumentace

Analýza proběhla s následujícími přístroji a softwarovými moduly:

• Agilent RapidFire 360 s ultrarychlým SPE modulem (C18 cartrige, p/n: G9205A).
• Agilent 6460 Triple Quadrupole Mass Spectrometer.
• Software MassHunter Qualitative Analysis B.04.00 a RapidFire Integrator.
• Mobilní fáze: Buffer A (10 mM ammonium acetát, 0,09 % formic acid, 0,01 % TFA), Buffer B (50 % methanol) a Buffer C (10 mM ammonium acetát v methanolu, 0,09 % formic acid, 0,01 % TFA).
• Parametry MS/MS: teplota plynu 225 °C, průtok 9 L/min, kapilární napětí 4000 V; vyhodnocení v režimu MRM.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala vynikající lineárnost pro cyklosporin A v rozsahu 7,8–1000 ng/mL (R2 > 0,999) a pro tacrolimus, everolimus a sirolimus v rozsahu 0,8–50 ng/mL (R2 > 0,995).
Limity kvantifikace (LOQ) byly 7,8 ng/mL pro cyklosporin A a 0,78 ng/mL pro ostatní analyty.
Precision (CV) a přesnost (accuracy) intradení i interdnění byly lepší než 10 % pro všechna sledovaná koncentrace.
Rychlost analýzy dosáhla více než 270 vzorků za hodinu při zanedbatelném carryover.

Přínosy a praktické využití metody

Díky zkrácenému chromatografickému cyklu a automatizované SPE je systém RapidFire/MS ideální pro vysoce průtokové laboratoře, klinické studie a rutinní terapeutický monitoring.
Umožňuje rychlé vyhodnocení velkých souborů vzorků bez nutnosti kompromisu na kvalitě dat.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření vysokopropustných SPE/MS/MS systémů na multiplexní analýzu dalších malých molekul a biomarkerů.
Integrace s robotizovanými přípravami vzorků a cloudovými platformami pro správu dat povede k ještě větší automatizaci a efektivitě.

Závěr

Agilent RapidFire High-Throughput MS/MS nabízí spolehlivou a rychlou alternativu k LC/MS pro simultánní kvantifikaci tacrolimu, sirolimu, everolimu a cyklosporinu A v celkové krvi.
Metoda kombinuje vysokou citlivost, přesnost a průchodnost analytických vzorků a je vhodná pro klinická i vědecká pracoviště.

Reference

• Schlicht K.E., Korman E.W., Miller V.P. a kol. High-Throughput Analysis of Tacrolimus in Whole Blood Using Ultrafast SPE/MS/MS. Poster #160, 59th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics, Denver CO, 2011.