Extending the Lower Limits of Quantification of a Therapeutic Oligonucleotide Through Microflow LC-MS/MS
Aplikace | 2019 | SCIEXInstrumentace
Oligonukleotidové terapeutika představují klíčovou oblast ve vývoji léčiv s potenciálem modulace genové exprese. Citlivá a přesná kvantifikace těchto látek v biologických maticích je nezbytná pro farmakokinetické studie a bezpečnostní hodnocení.
Cílem studie bylo porovnat tradiční IP-RP LC-MS analýzu s mikroflow LC-MS metodou pro kvantifikaci antisense oligonukleotidu fomivirsen pomocí systému SCIEX QTRAP 6500+ a M5 MicroLC s OptiFlow™ Turbo V.
Pro chromatografii byl použit IP-RP gradient s HFIP/DIEA v systému dvou mobilních fází, srovnané flow rates 300 µL/min versus 6 µL/min. Kvantifikace probíhala v negativním režimu ESI s MRM přechody pro multicharged ionty fomivirsenu. Adduktace Na+ a K+ byla monitorována a optimalizována na obou systémech.
Mikroflow LC-MS dosáhlo výrazného zlepšení citlivosti: spodní mez kvantifikace (LLOQ) se snížila z 5 ng/mL na 1 ng/mL a detekční limit (LOD) z 2 ng/mL na 0,5 ng/mL. Signifikantně se zvýšily intenzita píků, plocha signálu a poměr signál/šum při zachování chromatografické kvality.
Očekává se další rozvoj mikroflow technologií pro biofarmaceutické aplikace, integrace s automatizací vzorkování, rozšíření na jiné třídy oligonukleotidů a využití umělé inteligence pro predikci adduktace a optimalizaci ionizace.
Implementace mikroflow LC-MS na platformě SCIEX M5 s OptiFlow™ Turbo V významně rozšiřuje možnosti kvantifikace terapeutických oligonukleotidů díky vyšší citlivosti a nižší kontaminaci.
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QTRAP
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceSCIEX
Souhrn
Význam tématu
Oligonukleotidové terapeutika představují klíčovou oblast ve vývoji léčiv s potenciálem modulace genové exprese. Citlivá a přesná kvantifikace těchto látek v biologických maticích je nezbytná pro farmakokinetické studie a bezpečnostní hodnocení.
Cíle a přehled studie
Cílem studie bylo porovnat tradiční IP-RP LC-MS analýzu s mikroflow LC-MS metodou pro kvantifikaci antisense oligonukleotidu fomivirsen pomocí systému SCIEX QTRAP 6500+ a M5 MicroLC s OptiFlow™ Turbo V.
Použitá instrumentace
- Hmotnostní spektrometr SCIEX QTRAP® 6500+
- M5 MicroLC System s mikroflow zdrojem OptiFlow™ Turbo V
- Exion™ UHPLC s Ion Drive Turbo V™
- Kolony Phenomenex Clarity® Oligo-MS 50×2,1 mm a Phenomenex Gemini® C18 50×0,3 mm
Použitá metodika
Pro chromatografii byl použit IP-RP gradient s HFIP/DIEA v systému dvou mobilních fází, srovnané flow rates 300 µL/min versus 6 µL/min. Kvantifikace probíhala v negativním režimu ESI s MRM přechody pro multicharged ionty fomivirsenu. Adduktace Na+ a K+ byla monitorována a optimalizována na obou systémech.
Hlavní výsledky a diskuse
Mikroflow LC-MS dosáhlo výrazného zlepšení citlivosti: spodní mez kvantifikace (LLOQ) se snížila z 5 ng/mL na 1 ng/mL a detekční limit (LOD) z 2 ng/mL na 0,5 ng/mL. Signifikantně se zvýšily intenzita píků, plocha signálu a poměr signál/šum při zachování chromatografické kvality.
Přínosy a praktické využití metody
- Snížená spotřeba rozpouštědel a nižší kontaminace zdroje
- Možnost analýzy nízkokoncentrovaných vzorků
- Vyšší robustnost a delší intervaly mezi údržbami
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další rozvoj mikroflow technologií pro biofarmaceutické aplikace, integrace s automatizací vzorkování, rozšíření na jiné třídy oligonukleotidů a využití umělé inteligence pro predikci adduktace a optimalizaci ionizace.
Závěr
Implementace mikroflow LC-MS na platformě SCIEX M5 s OptiFlow™ Turbo V významně rozšiřuje možnosti kvantifikace terapeutických oligonukleotidů díky vyšší citlivosti a nižší kontaminaci.
Reference
- Warren D, McCarthy S, Xiong L. Extending the Lower Limits of Quantification of a Therapeutic Oligonucleotide Through Microflow LC-MS/MS. SCIEX, 2019.
Podobná PDF
Improve Sensitivity for Quantification of Antisense Oligonucleotides in Plasma Using Microflow LC MRM Methodology
2020|SCIEX|Postery
Improve Sensitivity for Quantification of Antisense Oligonucleotides in Plasma Using Microflow LC-MRM Methodology Ji Jiang, Sean McCarthy, Esme Candish, Lei Xiong SCIEX, 500 Old Connecticut Path, Framingham, MA 01520 INTRODUCTION Oligonucleotide therapeutics are rapidly growing as a class of therapeutic…
Klíčová slova
microflow, microflowoligonucleotides, oligonucleotidesantisense, antisensetechnote, technotepercent, percentfomivirsen, fomivirsenactual, actualelute, elutemean, meanoptimization, optimizationplasma, plasmacomponent, componentchromatography, chromatographyname, nameaccuracy
Gene Therapy and Oligonucleotide Compendium - Volume 1
2020|SCIEX|Příručky
Gene Therapy and Oligonucleotide Compendium Volume 1 Gene Therapy and Oligonucleotide Compendium Contents Introduction 4 Growing trends and emerging technologies for oligonucleotide and gene therapies 6 The global gene therapy & oligonucleotide market 8 Regional landscape North America EMEAI (Europe,…
Klíčová slova
gene, genetherapy, therapyoligonucleotide, oligonucleotidesciex, sciexcompendium, compendiumcontents, contentsdownload, downloadgexp, gexptechnical, technicalexpression, expressionprimer, primerdna, dnaplasmid, plasmidnote, notesnp
Sensitive Quantification of Therapeutic Oligonucleotides Extracted from Plasma Featuring the SCIEX QTRAP® 6500+ LC-MS/MS System Esme Candish1, Ji Jiang1, Andrew Hart2, Susovan Mohapatra2 1 SCIEX, Framingham MA, USA, 2 Wave Life Sciences, Lexington, MA, USA Oligonucleotide therapeutics and gene therapies…
Klíčová slova
ems, emsepi, epioligonucleotide, oligonucleotideida, idaaso, asolit, litscan, scanproduct, productleveraged, leveragedprecursor, precursorhelisa, helisaassay, assayion, ionlloq, lloqoligonucleotides
Ultra-Sensitive Quantification of Trastuzumab Emtansine in Mouse Plasma using Trap-Elute MicroLC MS Method
2018|SCIEX|Aplikace
Ultra-Sensitive Quantification of Trastuzumab Emtansine in Mouse Plasma using Trap-Elute MicroLC MS Method Featuring SCIEX QTRAP® 6500+ System with OptiFlow™ Turbo V source and M5 MicroLC system Lei Xiong, Ji Jiang, and Remco van Soest SCIEX, Redwood City, California, USA…
Klíčová slova
microflow, microflowimmunoaffinity, immunoaffinitymicrolc, microlcflow, flowphase, phasemobile, mobilerate, rateemtansine, emtansinetrap, trapvalue, valueslurry, slurryparameter, parameterquantification, quantificationelute, elutebead
