Development of an LC-MS/MS Method for the Analysis of Δ8-THC, Δ9-THC, and Their Metabolites in Whole Blood

Význam tématu

Testování přítomnosti Δ9-THC a jeho isomeru Δ8-THC v celém krevním vzorku je klíčové v toxikologii, dopravních kontrolách i klinických studiích. Přesná analýza mateřských kanabinoidů a jejich metabolitů (11-OH a COOH) zajišťuje spolehlivé určení konzumace a časové osy expozice.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a validovat LC-MS/MS metodu schopnou rozlišit izomerní páry Δ8-THC/Δ9-THC a jejich metabolity v celém krevním vzorku. Autoři vyzkoušeli tři typy chromatografických fází a optimalizovali ty, které dovolily nejlepší separaci, následně metodu aplikovali na reálné vzorky.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky krve se zpracovávaly kapalně-kapalnou extrakcí podle adaptované metody Tiscione et al. Postup zahrnoval přidání interní standardní směsi, okyselení, extrakci hexany:ethylacetát, centrifugaci, sušení pod dusíkem a rekonstituci v mobilní fázi. Chromatografická separace probíhala na kolóně Raptor FluoroPhenyl (100×3 mm, 2,7 µm) s mobilními fázemi 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě (A) a v methanolu (B), gradientem při 0,8 mL/min, teplotě 40 °C a injekčním objemu 5 µL.

Použitá instrumentace

LC-MS/MS systém trojitého kvadrupólu s MRM detekcí analyzoval přechody pro Δ8-THC, Δ9-THC, 11-OH-Δ8-THC, 11-OH-Δ9-THC, Δ8-THC-COOH a Δ9-THC-COOH. Pro ochranu analytické kolony byl použit ochranný patron Raptor EXP 5×3 mm.

Hlavní výsledky a diskuse

Ze tří testovaných fází (Biphenyl, ARC-18, FluoroPhenyl) zajistila nejlepší baseline separaci izomerů fáze FluoroPhenyl. Metoda vykazovala lineární rozsahy 0,5–100 ng/mL pro mateřské a hydroxy kanabinoidy a 2,5–500 ng/mL pro karboxylované metabolity (r2 ≥0,99). Přesnost a reprodukovatelnost (intra- a interdenní) splnila kritéria QC. Kontrola interferencí vůči 12 dalším kanabinoidům prokázala dostatečnou selektivitu.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda nabízí robustní nástroj pro forenzní a klinickou toxikologii, umožňuje spolehlivé rozlišení Δ8/9-THC a jejich metabolitů i v náročných matricích. Díky širokému lineárnímu rozsahu a vysoké přesnosti je vhodná pro rutinní monitoring i výzkumné aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k rozšíření o nové kanabinoidy, využití vysokorozlišující MS pro komplexnější profilaci, automatizaci extrakčních postupů a adaptaci na další biologické matice (moče, sliny). Kombinace s databázovými nástroji a umělou inteligencí poslouží pro rozsáhlé populační studie.

Závěr

Poptávka po spolehlivých metodách pro analýzu Δ8-THC, Δ9-THC a jejich metabolitů roste s rozšiřováním dostupných izomerů. Vyvinutá LC-MS/MS metoda na flurofenylové fázi poskytuje excelentní separaci, citlivost i reprodukovatelnost a je plně validní pro forenzní a klinickou praxi.

Reference

1. Karschner EL, Swortwood-Gates MJ, Huestis MA. Identifying and Quantifying Cannabinoids in Biological Matrices in the Medical and Legal Cannabis Era. Clinical Chemistry. 2020;66(7):888-914.
2. Tiscione NB, Miller R, Shan X, Sprague J, Yeatman DT. An Efficient, Robust Method for the Determination of Cannabinoids in Whole Blood by LC-MS-MS. Journal of Analytical Toxicology. 2016;40(8):639-648.