The Study of Three HPLC Column Chemistries for Optimal Separation of THC Isomers

Význam tématu

Štěpení a kvantifikace izomerů Δ8-THC-COOH a Δ9-THC-COOH je klíčové pro spolehlivou forenzní a klinickou analýzu biologických vzorků. Standardní chromatografické metody často neumožňují dostatečné rozlišení těchto strukturálně podobných metabolitů, což vede k nepřesným výsledkům při testování moči nebo krve.

Cíle a přehled studie / článku

Úkolem studie bylo porovnat tři různá HPLC stacionární fáze (Raptor FluoroPhenyl, Raptor C18, Raptor Biphenyl) a optimalizovat chromatografické podmínky pro co nejlepší oddělení izomerů Δ8-THC-COOH a Δ9-THC-COOH při minimálním času analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

• Stacionární fáze: Raptor FluoroPhenyl (100×2,1 mm, 2,7 µm), Raptor C18 (100×2,1 mm, 2,7 µm), Raptor Biphenyl (100×2,1 mm, 2,7 µm).
• Mobilní fáze: A – 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě; B – 0,1 % kyselina mravenčí v methanolu.
• LC–MS/MS přístroj: Shimadzu LCMS-8045, ionizace ESI v pozitivním režimu, teplota kolony 30 °C, maximální tlak 8700 psi.
• Optimalizace gradientu pro každou fázi s cílem co nejrychlejšího a nejúčinnějšího rozlišení.

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání stacionárních fází ukázalo:

• Raptor Biphenyl: téměř žádné rozlišení izomerů.
• Raptor C18: částečné oddělení, avšak s delší dobou analýzy a nedostatečnou účinností.
• Raptor FluoroPhenyl: úplné rozlišení Δ8-THC-COOH a Δ9-THC-COOH v 7 minutách (100×2,1, 2,7 µm) a dokonce v 5,25 minutách na kratší kolonu (50×2,1, 2,7 µm).
  Even při extrémních koncentracích (1000 ng/mL : 10 ng/mL) nebyly špičky izomerů interferenční.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda na FluoroPhenyl fázi nabízí:

• Rychlou a vysoce reprodukovatelnou analýzu izomerů THC-COOH.
• Minimalizaci interferencí i při vysokém poměru izomerů.
• Flexibilitu v adaptaci na různé rozměry kolony podle potřeb laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace metody do rutinních LC–MS/MS screeningů pro rozšířené testování drog.
• Další vývoj stacionárních fází s cílem snížit spotřebu mobilní fáze a dobu analýzy.
• Rozšíření aplikace na jiné tzv. „close analogues“ v oblasti forenzní a klinické toxikologie.

Závěr

Raptor FluoroPhenyl se ukázal jako optimální volba pro odlišení Δ8-THC-COOH a Δ9-THC-COOH. Vyvinutá metoda je rychlá, účinná a snadno přizpůsobitelná různým laboratorním podmínkám, čímž řeší klíčový problém ve forenzní a klinické analytice.

Reference

1. Lupo, S. The Big Pain: Development of Pain-Free Methods for Analyzing 231 Multiclass Drugs and Metabolites by LC-MS/MS. Restek Corporation, 2023.
2. Schwartz, N. Fluorophenyl LC Phases – what you should know. Restek ChromaBlog, 2017.
3. York, J. THC-COOH Detected! Δ-8 or Δ-9? Restek ChromaBlog, 2021.