Analysis of Isomers Δ-8-THC, Δ-9-THC, and Their Metabolites in Whole Blood by LC-MS/MS

Význam tématu

Testování celkové krve na přítomnost Δ9-THC a jeho metabolitů je klíčové pro klinické a toxikologické laboratoře. S nástupem produktů obsahujících Δ8-THC vzniká potřeba přesné rozlišení izomerů a jejich metabolitů, aby se zajistila validita výsledků a správné právní a zdravotní závěry.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a spolehlivou metodiku na bázi LC-MS/MS pro separaci a kvantifikaci Δ8-THC, Δ9-THC a jejich hydroxy- a karboxymetabolitů v matrici celkové krve. Metoda byla optimalizována tak, aby poskytovala dostatečné izomerické rozlišení v krátkém čase.

Použitá instrumentace

• Kapalinová chromatografie: Shimadzu Nexera X2
• Hmotnostní spektrometrie: SCIEX 4500 MS/MS
• Kolona: Raptor FluoroPhenyl 100×3,0 mm, 2,7 μm s odpovídajícím guard cartridgem
• Ionizace: ESI+ pro Δ-THC a hydroxy metabolity, ESI- pro karboxy metabolity

Použitá metodika

Vzorky: 500 μL krevní matrice obohacené standardy. Extrakce: kapalina-kapalina s hexany:ethylacetátem (80:20), acidifikace 1N HCl, centrifugace, vysušení dusíkem a reekstrakce ve směsi MPA:MBA 50:50. Chromatografie: gradient měnící poměry vody a methanolu s 0,1 % kyseliny mravenčí, průtok 0,8 mL/min, celková analýza 16 minut.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda efektivně oddělila tři páry izomerů v 13minutovém gradientu. Linearita byla pro všechny analytické signály potvrzena hodnotami R2 ≥0,99. Přesnost a opakovatelnost metody splňovaly kritéria (obnova ±10 %, RSD intraden <10 %, meziden 5–9 %). Nebyla zjištěna významná interference ze strany devíti testovaných kanabinoidů.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda umožňuje rychlé a citlivé stanovení THC izomerů při sníženém objemu vzorku (500 μL) a nižší spotřebě organických rozpouštědel. Je vhodná pro klinické, forenzní a farmaceutické laboratoře, které požadují spolehlivá data pro interpretaci intoxikací.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metody na nové kanabinoidy a jejich konjugáty, implementace vysokého rozlišení (HR-MS), automatizovaných a mikrofluidních příprav vzorků, stejně jako využití zelených rozpouštědel pro udržitelný provoz laboratoří.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda poskytuje robustní a reprodukovatelné rozlišení Δ8-THC, Δ9-THC a jejich metabolitů v krvi. Díky rychlé analýze, vynikající robustnosti a nízkým požadavkům na vzorek je vhodná pro široké uplatnění ve forenzní a klinické praxi.

Reference

1. Karschner E. L., Swortwood-Gates M. J., Huestis M. A. Identifying and Quantifying Cannabinoids in Biological Matrices in the Medical and Legal Cannabis Era. Clinical Chemistry. 2020;66(7):888-914.
2. Tiscione N. B., Miller R., Shan X., Sprague J., Yeatman D. T. An Efficient, Robust Method for the Determination of Cannabinoids in Whole Blood by LC-MS-MS. J Anal Toxicol. 2016;40(8):639-648.