Quantitative Separation of THC Isomers and Metabolites from Whole Blood

Význam tématu

Rozlišení psychoaktivních THC isomerů (Δ8-, Δ9-, Δ10-THC) od nepsychoaktivních látek (CBD, exo-THC) a jejich metabolitů je klíčové pro forenzní toxikologii. Izobarické interference a podobné fragmentační vzorce znesnadňují spolehlivou identifikaci a kvantifikaci.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout rychlou a citlivou LC/MS/MS metodu s použitím Agilent Captiva EMR–Lipid pro přípravu vzorků z plné krve a Agilent InfinityLab Poroshell 120 PFP kolonu pro chromatografické rozlišení, která dokáže v průběhu 15 minut separovat a kvantifikovat THC isomery a jejich hydroxy a karboxy metabolity s vyloučením isobarických interferentů.

Použitá metodika

Vzorek 500 µL plné krve byl aplikován na 3 mL Captiva EMR–Lipid cartridge, následoval přídavek 1,2 mL acetonitrilu/methanolu (85:15) pro proteinovou precipitaci a extrakci. Po 5minutovém inkubačním kroku byla analyta eluována pozitivním tlakem, vysušena dusíkem a rekonstituována v 100 µL methanol/voda (50:50) před LC/MS/MS analýzou.

Použitá instrumentace

• Kapalinové chromatografy Agilent 1260 Infinity II nebo 1290 Infinity II
• Poroshell 120 PFP kolona (2,1×100 mm, 2,7 µm) při 55 °C, průtok 0,5 mL/min
• Agilent 6475 nebo Ultivo triple quadrupole MS se zdrojem AJS ESI+ v režimu dMRM
• Mobilní fáze: voda s 0,1 % kyseliny mravenčí a methanol

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla baseline separace Δ8-, Δ9- a Δ10-THC isomerů, jejich hydroxy a karboxy metabolitů a omezila ko-eluci isobarických interferentů. Detekční limity jsou v nízkých ng/mL, linearita přesahuje R²=0,998 napříč koncentracemi 1–80 ng/mL (5–400 ng/mL v krvi) pro isomery a 5–400 ng/mL (25–2 000 ng/mL v krvi) pro karboxy metabolity. Obnovení analytů se pohybuje v rozsahu 80–120 %, což potvrzuje účinné odstraňování matricových složek.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza trvající 15 minut vhodná pro vysokoprodukční forenzní laboratoře
• Vysoká citlivost a spolehlivost kvantifikace s nízkými LOD/LOQ
• Čisté extrakty s minimem matrix efektu díky EMR–Lipid kartám
• Vhodné pro dopravní vyšetřování DUID i další forenzní aplikace

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může zahrnovat rozšíření panelu kanabinoidů, automatizaci přípravy vzorků a zkrácení doby analýzy. Kombinace s vysokorozlišovacími MS technikami umožní potvrzující analýzu a aplikaci i na jiné biologické matrice.

Závěr

Popsaná workflow spojuje účinné čištění EMR–Lipid kartami a rychlou LC/MS/MS analýzu, což umožňuje spolehlivé rozlišení psychoaktivních THC izomerů, jejich metabolitů a eliminaci izobarických interferentů s vysokou citlivostí a reprodukovatelností. Metoda je vhodná pro forenzní a dopravní toxikologii.

Reference

• Stevens J.; Zhao L. Efficient Quantitative Analysis of THC and its Metabolites in Whole Blood Using Agilent Captiva EMR–Lipid and LC-MS/MS. Agilent Technologies application note 5991-8635EN, 2020.