Tools to Evaluate the Impact of Re- Equilibration on a Compendial Method Using the Alliance™ iS HPLC System PDA Detector

Význam tématu

Gradientní HPLC metody vyžadují přesné obnovení počátečních podmínek na konci každého běhu, aby byla zajištěna stabilita baseliny, reprodukovatelné retenční časy a validní kvantifikace. Nedostatečná re-ekvilibrace vede k nestabilitě signálu a zhoršené přesnosti, což je kritické zejména u kompendiálních metod používaných v regulovaných laboratořích.

Cíle a přehled studie

Studie hodnotila vliv objemu mrtvého prostoru (dwell volume) na re-ekvilibraci USP metody stanovení acetaminofenu v tabletách. Hlavním cílem bylo ukázat, jak kompenzovat kratší re-ekvilibraci pomocí funkcí Empower CDS (Next Injection Delay) a Alliance iS Method Editor (Gradient Start) aniž by se měnil původní gradientní program.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda: USP Acetaminophen Tablets Assay, gradientní RP-HPLC detekce při 243 nm.

• LC systém: Alliance iS HPLC System PDA Detector
• Detektor: PDA s 10 mm flow cell
• Kolona: XSelect HSS T3 3.5 µm, 3.0×100 mm, 40 °C
• Mobilní fáze A: 1 % kyselina octová ve vodě; B: methanol
• Průtok: 0.5 mL/min; injekce 10 µL; teplota vzorků 15 °C
• CDS: Empower 3.8.1

Hlavní výsledky a diskuse

Bez kompenzace dwell volume (4.18 objemů kolony re-ekvilibrace) metoda splnila USP limity, ale vykazovala nestabilní baselinu a nedostatečné návraty tlaku k počáteční hodnotě. Při použití Next Injection Delay (3.34 min) se efektivní re-ekvilibrace zvýšila na 7.87 objemů kolony, což stabilizovalo baselinu a zlepšilo přesnost retenčních časů. Podobné zlepšení bylo dosaženo funkcí Gradient Start (1.67 mL před vstřikem). Celková přesnost ploch vrcholů a kvantifikace acetaminofenu zůstala konzistentní.

Přínosy a praktické využití metody

• Regulatorně vyhovující prodloužení re-ekvilibrace bez změny gradientního programu
• Zamezení nestability baseliny a posunům retenčních časů
• Minimalizace spotřeby mobilní fáze při zachování dostatečné re-ekvilibrace
• Uplatnění u dalších gradientních kompendiálních metod

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší integrace automatických nástrojů pro kompenzaci dwell volume přímo v analytických platformách a CDS. Dalším směrem je prediktivní optimalizace re-ekvilibrace pomocí strojového učení a adaptivní metody, které automaticky upraví re-ekvilibraci podle aktuálních parametrů systému.

Závěr

Kompenzace objemu mrtvého prostoru pomocí Next Injection Delay a Gradient Start umožňuje výrazné zlepšení stability chromatogramu a přesnosti retenčních časů u gradientních metod bez úprav původního gradientního programu. Alliance iS HPLC System PDA Detector spolu s Empower CDS nabízí flexibilní a regulatorně vyhovující řešení pro optimalizaci re-ekvilibrace.

Reference

• Dolan JW How Much Is Enough LC-GC North America 2003 Oct 21(10) 968–962
• United States Pharmacopeia USP Monographs Acetaminophen Tablets 2023
• Stoll DR Seidl C Column Re-equilibration Following Gradient Elution LC-GC North America 2019 Nov 37(11) 790–795
• Waters Columns Calculator Version 2.0