Analysis of Radioligand Therapy Components Using Reversed-Phase and HILIC Columns

Význam tématu

Radioligandová terapie představuje moderní přístup v léčbě nádorových onemocnění, který kombinuje selektivní navázání radioaktivní částice na cílovou molekulu s minimalizací poškození okolní zdravé tkáně. Analytická kontrola složek radioligandů je klíčová pro zajištění bezpečnosti a účinnosti léčby.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této studie bylo porovnat výkon reverzní fáze (RP) a hydrophilní interakční chromatografie (HILIC) při analýze tří složek radioligandového preparátu PLUVICTO® (Lutetium-177 vipivotide tetraxetan):

• hlavní léčivá sloučenina (vipivotide tetraxetan),
• ligand-linker konjugát,
• chelační činidlo DOTA.

Studie zahrnovala testování retence, separace a reprodukovatelnosti na různých stacionárních fázích a hardware s inertními povrchy.

Použitá metodika a instrumentace

Analytické techniky:

• Reverzní fáze UPLC s kolonkou HSS T3 Premier (RP-HPS) a C18 AX mixed-mode (RP/AEX).
• HILIC separace na kolonce Atlantis Premier BEH Z-HILIC.
• Detekce: PDA, SIR a full scan MS (ESI+) na Xevo TQ-S Micro.

Klíčové parametry:

• Mobilní fáze RP: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě/methanolu;
• Mobilní fáze HILIC: acetonitril/voda s 10 mM ammonium formiátu pH 3;
• Průtok 0,5 mL/min, kolony a vzorky temperovány na 30 °C/10 °C;
• Inertní hardware s technologií MaxPeak HPS pro omezení adsorpce kyselých analyz.

Hlavní výsledky a diskuse

Reverzní fáze:

• HSS T3 Premier efektivně retencuje ligand-linker a vipivotide, avšak nedostatečně DOTA.
• Mixed-mode C18 AX zlepšila rozlišení ligand-linkeru a vipivotide, avšak DOTA vykazovala roztřepené a slabé špičky.

HILIC:

• Atlantis BEH Z-HILIC dosažila dostatečné retence všech tří sloučenin, s elucí řazenou podle polarity (vyšší logP dříve).
• Inertní hardware významně zlepšil obnovu a stabilitu detekce, eliminoval kovové addukty, které se při pokusu na nerezovém sloupci u DOTA a vipivotide tvořily.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizovaná metoda HILIC s inertním povrchem:

• Umožňuje simultánní analýzu syntetických meziproduktů a finálního radioligandu před dozářením, což zkracuje čas QC.
• Snižuje riziko ztrát a variability způsobené adsorpcí na kovových komponentech systému.
• Eliminuje nutnost mobilních fáze s přídavkem chelatačních činidel (např. EDTA).

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj radioligandových přípravků bude vyžadovat:

• Další optimalizaci HILIC fází pro rychlejší analýzu a vyšší propustnost.
• Rozšíření inertních povrchů do dalších segmentů LC-MS systémů.
• Validaci metod v rámci regulovaných norem (FDA, EMA) pro klinické i preklinické studie.

Závěr

Pro důkladnou kontrolu složek radioligandové terapie PLUVICTO® je nejvhodnější HILIC separace na inertní BEH Z-HILIC koloně. Technologie MaxPeak HPS eliminuje nežádoucí kovové interakce, zlepšuje rekoveru analyzátů a stabilitu detekce. RP separace zůstává vhodná pro oddělení nevysloveně polárních komponent, avšak pro chelační činidla se HILIC ukazuje nezbytnou.

Reference

1. Patient Brochure PLUVICTO, Waters Corporation (2025).
2. Zhang J. et al., Mol. Biomedicine 4:26 (2023).
3. Ferreira C. et al., Biomed. Pharmacotherapy 2017.
4. New L.S., Chan E., J. Chrom. Sci. (2008).
5. Walter T.H. et al., J. Sep. Sci. (2020).
6. Bijttebier S. et al., J. Chrom. A (2014).
7. Delano M. et al., Anal. Chem. 93 (2021).
8. Jung M.C., Lauber M.A., Waters Application Notes (2020–2022).
9. Maly M. et al., Microchem. J. (2023).
10. Dinh N. et al., J. Chrom. A (2013).
11. Gilar M. et al., J. Sep. Sci. (2022).
12. Fu Y. et al., Anal. Chem. 95 (2023).