Analysis of Creatine and Creatinine on a Porous Graphitic Carbon Column by HPLC/UV

Význam tématu

Creatine a creatinin jsou klíčové biochemické markery energetického metabolismu svalů a renální funkce. Přesná analýza jejich koncentrací v biologických vzorcích je zásadní pro diagnostiku onemocnění ledvin, monitorování sportovních suplementů a farmaceutický výzkum.

Cíle a přehled studie / článku

Tato studie demonstruje rychlou a jednoduchou izokratickou HPLC/UV metodu na pórovitém grafitickém uhlí (Hypercarb) pro separaci a kvantifikaci kreatinu a kreatininu za méně než pět minut s vysokou opakovatelností.

Použitá metodika a instrumentace

• Kolona: Thermo Scientific Hypercarb, 5 µm, 100 mm × 2,1 mm
• Mobilní fáze: H2O/MeCN/TFA (96,95 : 3 : 0,05 v/v)
• Průtok: 0,2 mL/min; teplota kolony: 30 °C; teplota autosampleru: 20 °C
• Detekce: UV při 216 nm; objem injekce: 5 µL; doba běhu: 5 min
• Příprava standardů: primární standardy 1000 µg/mL ve vodě, pracovní směs vytvořena v mobilní fázi se 50 µg/mL kreatinu a 10 µg/mL kreatininu

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje retenčních faktorů k′ = 1,12 pro kreatin a k′ = 2,44 pro kreatinin, efektivity > 30 000 desk/m pro kreatin a > 40 000 desk/m pro kreatinin, faktoru špičky cca 1,33 a 1,48 a rozlišení R = 4,81. Opakovatelnost parametrů RSD < 1 % potvrzuje vysokou přesnost. Celková analýza trvá méně než 5 minut.

Přínosy a praktické využití metody

Izokratická metoda bez potřeby iontových párů nabízí rychlé a robustní měření ve standardních laboratořích pro klinické vyšetření, kontrolu sportovních doplňků a farmaceutický vývoj.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné rozšíření na detekci hmotnostní spektrometrií, automatizaci přípravy vzorků, aplikace na další vysoce polarní analyty či miniaturizované chromatografické systémy s vysokou propustností.

Závěr

Pórovité grafitické uhlí Hypercarb se ukázalo jako efektivní stacionární fáze pro rychlou a reprodukovatelnou separaci kreatinu a kreatininu v izokratickém režimu, vhodnou pro různé analytické aplikace vyžadující vysokou přesnost a krátkou dobu analýzy.

Reference

• Spencer K. Ann. Clin. Biochem. 1986, 23, 1-25.
• Kroll MH, Roach NA, Poe B, Elln RJ. Clin. Chem. 1987, 33, 1129-1132.
• Lindbäck B, Bergman A. Clin. Chem. 1989, 35, 835-857.
• Bacon B, Pardue HL. Clin. Chem. 1991, 37, 1338-1344.
• Tsikas D, Wolf A, Frölich JC. Clin. Chem. 2004, 50(1), 201-203.
• Harmoinen A, Sillanaukee P, Jokela H. Clin. Chem. 1991, 37(4), 563-565.
• Carling RS, Wood SL, Calvin TC. Ann. Clin. Biochem. 2008, 45, 575-584.
• Park E-K, Watanabe T, Gee SJ, Schenker MB, Hammock BD. J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 333-336.
• Knox J, Ross P. Adv. Chromatogr. 1997, 37, 73-119.