Analysis of Nucleotides Using Core Enhanced Technology Accucore HPLC Columns

Význam tématu

Nukleotidy představují základní stavební kameny genetického materiálu a klíčové zdroje energie v buňkách. Jejich spolehlivá a rychlá analýza je nezbytná v biochemickém výzkumu, farmaceutické kontrole kvality i ve výživě, zejména u potravin obohacených pro kojence.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo demonstrovat rychlou a efektivní chromatografickou separaci pěti běžných nukleotidů (CMP, GDP, AMP, ADP, ATP) za méně než pět minut pomocí kolony Accucore aQ s technologií Core Enhanced. Metoda je navržena pro konvenční HPLC přístroje a využívá plně vodné mobilní fáze.

Použitá metodika a instrumentace

Analytický postup spočívá v izokratické separaci:

• HPLC systém Thermo Scientific
• Kolona Accucore aQ 2,6 µm 100 × 2,1 mm
• Mobilní fáze 50 mM fosforečnan draselný pH 6
• Průtok 0,7 mL min
• Teplota kolony 30 °C
• Objem injekce 2 µL
• Detekce UV při 260 nm

Příprava vzorků a standardů:
Jednotlivé primární standardní roztoky nukleotidů 5 mg mL připravené ve vodě, smíšený pracovní roztok vznikl kombinací 50 µL každého standardu doplněného na 1 mL.

Hlavní výsledky a diskuse

Podmínky analýzy umožnily kompletní rozdělení pěti nukleotidů do pěti minut s vynikající opakovatelností:

• RSD retention times < 0,1 %
• RSD ploch píku < 1,7 %
• Stabilita retence a ploch v čistě vodné fázi

Technologie Core Enhanced s částečně porézním povrchem zajišťuje nízký zpětný tlak a vysokou účinnost separace polarních sloučenin.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší extrémně rychlou analýzu při minimálních provozních nákladech a snadné implementaci do rutinních laboratoří pro farmaceutickou kontrolu, klinické stanovení i potravinářské účely.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může spočívat v integraci s hmotnostní spektrometrií pro selektivní detekci, rozšíření spektra analyzovatelných nukleotidů či automatizaci přípravy vzorků pro vysokou propustnost.

Závěr

Accucore aQ kolona nabízí rychlou, robustní a reprodukovatelnou chromatografickou metodu pro stanovení nukleotidů bez nutnosti organických modifierů v mobilní fázi, což zjednodušuje provoz a údržbu HPLC systémů.

Reference

• Freeke J Application Note ANCCSCETNUCLEOT 1211 Thermo Fisher Scientific 2011