Choline in Infant Formula and Adult Nutritionals, a Single Laboratory Validation

Význam tématu

Cholin je nezbytná biomolekula hrající klíčovou roli v methylaci, signál­ní trans­membra­nové komunikaci a vývoji mozku. Vzhledem k omezené vlastní syntéze je nutné doplňovat ho potravou, přičemž kojenecké formule a výživové doplňky pro dospělé bývají obohacovány o cholin. Spolehlivá a citlivá analýza cholinu v těchto produktech je zásadní pro splnění regulačních požadavků na označování a zajištění kvality.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo ověřit a validovat novou iontově chromatografickou metodu pro stanovení celkového cholinu v širokém spektru kojeneckých a dospělých nutričních formulí. Metoda využívá moderní RFIC™ systém s eluentní generací, dvoumilimetrový Dionex IonPac CS19 kolonu a potlačenou vodivostní detekci. Validace proběhla formou jedné laboratoře (SLV) na 17 standardních i placebo matricích SPIFAN.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek (prášek či ready-to-feed kapalina) byl zpracován pomocí mikrovlnou asistované acidní hydrolýzy, což zkrátilo čas štěpení negen­destinovaných forem cholinu až devítinásobně ve srovnání s klasickou vodní lázní. Následovala neutralizace vzorku na pH ~6 pomocí OnGuard II A kartridže a injektáž do RFIC™ systému.

• Systém: Thermo Scientific Dionex ICS-5000 s eluentním generátorem EGC III MSA a CR-CTC II katiónovou pastí
• Kolona: Dionex IonPac CG19 (2×50 mm) + CS19 (2×250 mm)
• Eluent: MSA, gradient 6,4 mM → 25 mM
• Detekce: potlačená vodivost, CSRS 300 sopor
• Vzorkovač: AS-AP autosampler při 10 °C
• Příprava vzorku: CEM MARS 6 mikrovlnný digestion systém

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární kalibrace pro cholin byla prokázána v rozsahu 0,6–75 mg/L (R2 > 0,9999) s chybami pod 5 %. Detekční a kvantifikační limity v matrici dosahovaly 0,009 a 0,012 mg/100 g, což významně překračuje požadavky SMPR (0,7 a 2 mg/100 g). Opakovatelnost (n = 2, 6 dnů) a mezilaboratorní přesnost byly ve všech 12 matricích pod 3 % RSD. Analýzy NIST SRM 1849a daly 93 % shodu s certifikovanou hodnotou. Recoverie spikovaných vzorků se pohybovaly mezi 92,8 a 101 % s nízkou variabilitou.

Přínosy a praktické využití metody

Nová metoda zkracuje dobu přípravy vzorků, eliminuje ruční přípravu elučního roztoku, zvyšuje citlivost a stabilitu analýzy. Je vhodná pro rutinní kontrolu cholinu v kojeneckých formulích, tabletách, prášcích a hotových nápo­jích ve výzkumných i výrobních laboratořích QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření RFIC™ technologií pro stanovení dalších biologicky aktivních látek a mikronutrientů v komplexních matricích. Integrace automatizovaných přípravných pracovišť a sofistikovaných software pro správu dat umožní zvýšit propustnost a reprodukovatelnost analýz v průmyslových podmínkách.

Závěr

Validovaná iontově chromatografická metoda s elektrolitickou generací elu­entu a potlačenou vodivostní detekcí splňuje požadavky AOAC SMPR pro stanovení celkového cholinu v kojeneckých a dospělých výživových produktech. Je robustní, rychlá a přesná, což ji předurčuje k širokému využití v analytických laboratořích.

Reference

1. Dietary Reference Intakes for Thiamin, Riboflavin, Niacin, Vitamin B6, Folate, Vitamin B12, Pantothenic Acid, Biotin, and Choline; National Academies Press, 1998.
2. CFR Title 21, Section 107.100 Nutrient Specifications; FDA, 2011.
3. AOAC Official Method 999.14: Enzymatic colorimetric method for choline; AOAC Int., 1999.
4. Woollard D. C., Indyk H. E. J. AOAC Int., 2000, 83, 131–138.
5. Thermo Scientific Application Update 189: RFIC determination of choline; 2012.
6. AOAC SMPR 2012.013: Total choline in infant and adult nutritional formula; 2012.