Rapid and Sensitive Analysis of Antifungal Agents in Human Serum Using the Agilent 6475 LC/TQ

Význam tématu

Therapeutické monitorování (TDM) antifungálních léčiv v séru pacienta je zásadní pro optimalizaci účinné dávky, minimalizaci toxicity a prevenci rezistence patogenů. Rychlé a citlivé stanovení koncentrací více sloučenin zvyšuje kvalitu klinické péče zejména u rizikových pacientů s invazivní mykózou.

Cíle a přehled studie

Autoři vyvinuli a validovali metodu pro kvantitativní stanovení osmi antifungálních látek (5‐fluorocytosin, flukonazol, hydroxy‐itrakonazol, isavukonazol, itrakonazol, posakonazol, ketokonazol, vorikonazol) v lidském séru během 3,5minutové LC/TQ analýzy s použitím Agilent 6475 a soupravy RECIPE ClinMass TDM.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II High-Speed Pump (G7120A)
• Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B)
• Agilent 1290 Infinity II Multicolumn Thermostat (G7116B)
• Agilent 6475 LC/TQ (G6475AA) s Agilent Jet Stream ionizačním zdrojem

Použitá metodika

Vzorky byly připraveny smísením 100 μL interního standardu s precipitátorem a 50 μL séra, extrahovány na Geno/Grinderu, odstředěny a 20× zředěny. Injekce 2 μL do LC kolony (RECIPE prefilter + analýza). Mobilní fáze A/B v gradientu 0−3,5 min, tok 0,6 mL/min, teplota kolony 40 °C. Detekce v režimu MRM, pozitivní polarita, optimalizované tranzice pro každou látku.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vynikající linearitu (R2 ≥ 0,995) a nízké LOQ 2,5−89 µg/L v závislosti na látce. Mezidenní přesnost QC byla 94,1–106,2 % a precizita RSD < 5,6 %. Chromatografické oddělení bylo dobré pro šest z osmi látek, přičemž částečné překrytí posakonazolu a hydroxy‐itrakonazolu nezasahovalo do kvantifikace díky selektivitě MRM. Metoda umožňuje až 350 analýz za den bez významného carry‐over.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a spolehlivé stanovení klíčových antifungálních léčiv
• Jednoduché přípravné postupy podporují vysokou propustnost
• Vhodné pro rutinní TDM v klinických laboratořích
• Minimalizace biomedicínských rizik spojených s toxicity a rezistencí

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může zahrnovat rozšíření panelu analyzovaných látek, automatizaci přípravné fáze pomocí robotických systémů a integraci s laboratorními informačními systémy. Potenciál aplikace zahrnuje personalizované dávkování a on‐line monitorování terapie v reálném čase.

Závěr

Validovaná metoda na Agilent 6475 LC/TQ ve spojení se soupravou RECIPE ClinMass TDM nabízí rychlý, citlivý a robustní nástroj pro terapeutické monitorování antifungálních léčiv v séru, umožňující vysokou propustnost a přesné dávkování u pacientů s invazivními mykózami.

Reference

• Ashbee HR, Barnes RA, Johnson EM, Richardson MD, Gorton R, Hope WW. Therapeutic Drug Monitoring (TDM) of Antifungal Agents: Guidelines from The British Society for Medical Mycology. J. Antimicrob. Chemother. 2014;69(5):1162–1176.