Quantification of antimycotics in human plasma or serum by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research

Význam tématu

Monitoring koncentrací antimykotik v biologickém materiálu je klíčový pro optimalizaci terapie a prevenci toxicity. Kvantitativní analýza účinných látek v plazmě či séru usnadňuje terapeutický drug monitoring (TDM) a podporuje individualizaci léčby pacientů s plísňovými infekcemi.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat rychlou a citlivou metodu pro současné stanovení osmi antimykotik (5-fluorocytosin, fluconazol, hydroxyitrakonazol, isavukonazol, itrakonazol, ketokonazol, posakonazol, vorikonazol) v lidské plazmě nebo séru za účelem klinického výzkumu.

Použitá metodika a instrumentace

• Odběr vzorku: 50 µl plazmy/séra přidaných k interním standardům.
• Příprava: offline precipitace bílkovin (protein precipitation) přímým přidáním 100 µl precipitantu s isotopově značenými standardy, vortex, centrifugace a přenos supernatantu.
• Chromatografie: C18 kolona a mobilní fáze od RECIPE, lineární gradient během 3,7 minut (flow 0,65 ml/min, injekční objem 4 µl, teplota kolony 40 °C).
• Detekce: LC–MS/MS ve vyhřívané elektrosprejové ionizaci (HESI) s režimem polarity switching a selected reaction monitoring (SRM), dvě tranzice na analytem pro kvantifikaci a potvrzení.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Vanquish Flex Binary LC systém
• Thermo Scientific TSQ Quantis triple quadrupole mass spectrometer s HESI
• Software Thermo Scientific TraceFinder 4.1 pro akvizici a vyhodnocení dat

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odezvu v rozsazích kalibratorů (např. 5,12–117 µg/ml pro 5-fluorocytosin, 0,565–12,6 µg/ml pro fluconazol apod.). Bias mezi nominálními a zpětně vypočtenými koncentracemi kontrolních vzorků se pohyboval mezi –8,9 % a +1,6 %. Intra-assay přesnost (% CV) byla vždy nižší než 12,7 %, inter-assay přesnost nepřekročila 9,4 %. Rychlá návratnost (<4 min) a nízké nároky na objem vzorku podporují vysokou propustnost.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá a rychlá příprava vzorku bez složitých extrakcí.
• Současné stanovení osmi klíčových antimykotik v jediném běhu.
• Vhodné pro klinický výzkum i podporu TDM ve výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Roste poptávka po rozšířených multianalyte panelech v TDM, plné automatizaci přípravy vzorků a integraci metod do laboratorních informačních systémů. Dále se očekává adaptace na menší platformy pro vyšší propustnost a zavádění umělé inteligence pro optimalizaci kvantifikace.

Závěr

Navržená LC–MS/MS metoda splňuje požadavky klinického výzkumu na citlivost, linearitu, přesnost a opakovatelnost. Umožňuje efektivní stanovení osmi antimykotik v plazmě či séru a poskytuje robustní základ pro TDM a klinické studie.

Reference

• De Nardi C., Indelicato S. Quantification of antimycotics in human plasma or serum by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research. Thermo Fisher Scientific, Technical Note 65149, 2018.