A D E K - Easy separation of fat-soluble vitamins using GPC/SEC

Význam tématu

Fat-rozpustné vitaminy jsou klíčové pro řadu fyziologických funkcí a jejich přehnaný příjem může vést k toxicitě. Spolehlivá analytická metoda k jejich stanovení je zásadní pro kontrolu kvality doplňků stravy.

Cíle a přehled studie

Článek popisuje vývoj izokratické HPLC metody založené na chromatografii velikostní exkluze (GPC/SEC) k simultánnímu stanovení vitaminů A palmitátu, D3, E a K v doplňcích stravy.

Použitá instrumentace

AZURA® analytický systém:

• Pumpa AZURA P 6.1L pro normální fázi
• 2kanálový GPC odplynovač
• Autosampler AZURA AS 6.1L
• Detektor UV UVD 2.1L při 280 nm
• Termostat AZURA CT 2.1 na 40 °C
• Kolóny 2× AppliChrom ABOA StyDiViBe (35 Å, 300×8 mm ID)
• Eluent: stabilizovaný tetrahydrofuran, 1 mL/min, 25 min izokrat
• Injekční objem 100 µL

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla lineárních kalibračních křivek (R2 > 0.999) pro všechny vitaminy. Limity detekce a kvantifikace byly:

• Vitamin A palmitát: LOD 0.10 µg/mL, LOQ 0.34 µg/mL
• Vitamin D3: LOD 0.16 µg/mL, LOQ 0.54 µg/mL
• Vitamin K: LOD 0.40 µg/mL, LOQ 1.33 µg/mL
• Vitamin E: LOD 2.00 µg/mL, LOQ 6.40 µg/mL

Peaks nebyly zcela odděleny do baseline, ale kvantifikace byla možná. Zlepšení rozlišení vitaminu E by vyžadovalo přidání další kolony.

Přínosy a praktické využití metody

Izokratický SEC postup nabízí jednoduchou alternativu k gradientním RP metodám, vhodnou pro rutinní kontrolu kvality doplňků stravy díky nižší spotřebě rozpouštědel a snadné implementaci.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze dále rozvíjet:

• Optimalizací délky či počtu kolón pro zlepšení rozlišení
• Integrací s hmotnostní spektrometrií pro potvrzení identity
• Aplikací na složitější matice potravinových vzorků
• Automatizací a miniaturizací pro vysokou propustnost

Závěr

Izokratická GPC/SEC metoda pro stanovení vitaminů A, D, E a K poskytuje spolehlivou kvantifikaci s dostatečnou citlivostí a představuje cenný doplněk ke stávajícím RP metodám pro kontrolu doplňků stravy.

Reference

1. Fat-Soluble Vitamins: A, D, E, and K; Fact Sheet No. 9.315, Food and Nutrition Series/Health
2. Albahrani AA, Greaves RF; Fat-Soluble Vitamins: Clinical Indications and Current Challenges for Chromatographic Measurement