A, B, D, E – Simultaneous determination of water- and fat-soluble vitamins

Význam tématu

Současné metody analýzy vitaminů často vyžadují samostatné postupy pro vodou a tukem rozpustné vitaminy, což prodlužuje dobu analýzy a zvyšuje spotřebu rozpouštědel. Simultánní stanovení obou skupin vitaminů usnadňuje provedení kompletního profilu ve vzorcích potravin či doplňků stravy a šetří čas i náklady laboratoří.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat metodu na jednom reverzním fázovém HPLC systému, která umožňuje současné stanovení tří vodou rozpustných vitaminů (B2, B9, B12) a tří tukem rozpustných (A palmitát, D3, E). Studie se zaměřila na optimalizaci mobilní fáze, gradientu a programů detekčních vlnových délek.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá HPLC se sloupcem C18 (150×3 mm, 3 µm) v reverzní fázi s gradientem dvoufázové mobilní fáze (voda s 0,01 % TFA vs. methanol). Detekce probíhá pomocí DAD s přepínáním vlnových délek v časovém programu. Rozpouštědla: voda/TFA pH 4 (A) a methanol (B); průtok 0,5 ml/min; teplota kolony 30 °C; injekční objem 5 µl.

• Pumpa AZURA P 6.1L
• Autosampler AZURA AS 6.1L s chlazením
• Detector AZURA DAD 6.1L s UV flow cell
• Termostat AZURA CT 2.1
• Kolona Eurospher II 100-3 C18P s předkolonou
• Software ClarityChrom 8.2.3

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vynikající linearitu pro všechny analyty (R2 > 0,9996) v rozsahu 2–50 µg/ml. LOQ se pohybovaly od 0,010 µg/ml pro B2 do 0,668 µg/ml pro A palmitát. LOD byly adekvátně nižší (S/N=3). Chromatogram standardů ukázal šest dobře oddělených píkov s časem analýzy 28 minut. Diskuse zdůrazňuje výzvu při extrakci: je nutné použít dva odlišné extrakční protokoly (vodný a organický), ale samotná chromatografie probíhá na jednom systému.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda výrazně snižuje spotřebu organických rozpouštědel a dobu analýzy tím, že eliminuje potřebu separátních HPLC běhů pro vodou a tukem rozpustné vitaminy a umožňuje provádět měření na jediném přístroji. To vede k nižším provozním nákladům i rychlejšímu zpracování vzorků v potravinářských i farmaceutických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat automatizaci extrakce, rozšíření spektra vitaminů a využití hmotnostní detekce (LC–MS) pro zvýšení selektivity. Metoda lze adaptovat na různé matrice (nápoje, potravinové doplňky, biologické vzorky) a integrovat do platformy pro rutinní kontrolu kvality.

Závěr

Vyvinutá reverzní fázová HPLC metoda pro simultánní stanovení vitaminů B2, B9, B12, A palmitát, D3 a E nabízí rychlé, spolehlivé a nákladově efektivní řešení. Kombinace gradientu, vlnové délky a optimalizované extrakce umožňuje vysokou citlivost a přesnost měření na jedné chromatografické soustavě.

Reference

• https://www.verywellhealth.com/fat-vs-water-soluble-998218, přístup 2021-09-27
• Fat-Soluble Vitamins: A, D, E, and K; Fact Sheet No. 9.315, Food and Nutrition Series/Health, https://extension.colostate.edu/topic-areas/nutrition-food-safety-health/fat-soluble-vitamins-a-d-e-and-k-9-315/, přístup 2021-09-27