Applications Collection of solutions by KNAUER

Význam tématu

Kontaminace pistácií aflatoxiny, karcinogenními látkami produkovanými houbami rodu Aspergillus, představuje závažné riziko pro lidské zdraví. Vzhledem k odolnosti aflatoxinů vůči běžným potravinářským úpravám (sušení, tepelná úprava) je nutné spolehlivě detekovat i minimální koncentrace v potravinách a krmivech.

Cíle a přehled metody

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, citlivou a robustní HPLC metodu pro stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 v extraktech pistácií, včetně jednoduché a účinné předúpravy vzorku a selektivní detekce po fotochemické postkolonové derivatizaci UV zářením.

Použitá instrumentace

• HPLC systém AZURA® Plus (pumpa P 6.1L HPG, autosampler AS 6.1L, termostat CT 2.1).
• Detektor FLD RF-20Axs s UVE Box fotochemickým reaktorem pro postkolonovou derivatizaci.
• Kolona Eurospher II C18 (100-3, 150 × 4.6 mm) s prekolonou.
• OpenLAB CDS EZChrom pro řízení a vyhodnocení.

Použitá metodika

• Extract vysušených a drcených pistácií (solid-liquid extrakce MeOH/H2O 17:3), následovaná liquid-liquid extrakcí (n-hexan a chloroform) a SPE (křemelina, praní n-hexanem, diethyletherem, chloroformem).
• Isokratická HPLC eluce s mobilní fází voda/acetonitril/formiát (83:5:12), rychlost 2.4 mL/min, kolona na 60 °C.
• Fotochemická postkolonová derivatizace UV 254 nm a následná FLD detekce (Ex 365 nm/Em 460 nm).
• Výpočet LOD/LOQ, recovery a robustnosti podle požadavků EU na stanovení aflatoxinů.

Hlavní výsledky a diskuse

• Dosahována vysoká citlivost: LOD 0.05 ng/mL pro B1/G1 a 0.015 ng/mL pro B2/G2, což je 3,4× a 11,3× lepší než požaduje EU.
• Recovery 78–87 % při LOQ až 20 ng/mL, RSD ret.z časů < 0.1 % a plochy < 0.5 %.
• Robustní separace i při variacích teploty ±2 °C, průtoku ±0.2 mL/min a složení eluční směsi ±2 %.
• V analyzovaných pistáciích byly hladiny aflatoxinů pod LOD/EU limity.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoce citlivé a selektivní stanovení aflatoxinů v komplexních potravinářských matricích.
• Jednoduchá, netoxická postkolonová derivatizace bez nutnosti halogenových činidel.
• Vhodné pro rutinní kontrolu aflatoxinů ve zpracovaných potravinách a v krmivech.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s kapalinovou hmotnostní spektrometrií pro rozšířené multiplexní analýzy mykotoxinů.
• Automatizace přípravy vzorků pro vysokou propustnost v monitorovacích laboratořích.
• Aplikace podobných postupů na stanovení dalších potravinářských kontaminantů.

Závěr

Nová metoda spojuje jednoduchou předúpravu, rychlou HPLC separaci a citlivou fotochemickou detekci aflatoxinů. Splňuje přísné požadavky na LOD, LOQ, recovery a robustnost, a je plně využitelná pro rutinní kontrolu bezpečnosti potravin.

Reference

• Hedayati M.T. et al., Microbiol. 153, 1677–1692 (2007).
• WHO, Food Safety Digest, Aflatoxins, Ref. No.: WHO/NHM/FOS/RAM/18.1 (2018).
• FDA CPG Sec. 683.100 Action Levels for Aflatoxins in Animal Food (2019).
• Reg. (EC) No 401/2006, Sampling and analysis methods for mycotoxins (2016).
• Reg. (EC) No 1881/2006, Maximum levels for contaminants in foodstuffs (2006).