Simultaneous Analysis of Vitamins B7, B9, and B12 in Infant Formula

Význam tématu

Simultánní stanovení vitamínů B7, B9 a B12 v dětské výživě je klíčové pro zajištění správné nutriční bilance a prevenci deficitu těchto esenciálních mikronutrientů. Nízké koncentrace vitamínů a složitá matice kojeneckých mlék vyžadují vysoce citlivé, selektivní a robustní analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem této aplikace bylo vyvinout a validovat LC-DAD metodu umožňující současné stanovení vitamínů B7 (biotin), B9 (kyselina listová) a B12 (cyanokobalamin) v infantní formuli. Metoda využívá Agilent 1260 Infinity II Prime LC se speciálním 60 mm Max-Light cartridge flow celou pro zvýšení citlivosti detekce.

Použitá metodika a instrumentace

Využitá instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II Prime LC (pumpa G7104C, multisampler G7167A, termostat G7116A)
• Diode Array Detector 1290 Infinity II DAD s 60 mm Max-Light cartridge flow celou (G4212-60007)
• Kolona Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-Aq (3×100 mm, 2,7 µm, p/n 685975-314)
• Imunoadsorpční kolona EASI-EXTRACT MULTI-VIT B (R-Biopharm) pro očistu vzorku
• Software Agilent OpenLab CDS 2.7 pro akvizici a zpracování dat

Vzorek se zpracoval enzymovou hydrolýzou pepsinem, imunoadsorpční očistou, elucí 0,5 % NH₄OH v methanolu a následnou koncentrací eluátu. Chromatografie probíhá gradientně s 0,0125 % formiátovou vodou (A) a acetonitrilem (B) při 0,5 mL/min a teplotě kolony 40 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOQ 36,1 ng/mL pro B7, 0,3 ng/mL pro B9 a 1,5 ng/mL pro B12. Kalibrační křivky pro všechny vitamíny vykazovaly vynikající lineární vztah s R² = 1,00. Opakovatelnost (n=6) byla < 0,1 % pro retenční časy a < 2 % pro plochy píků. Recoverie z NIST 1869 SRM činily 71 % (B7), 92 % (B9) a 81 % (B12). V komerčním vzorku byly naměřeny hodnoty 0,14 µg/g, 1,00 µg/g a 0,0068 µg/g pro B7, B9 a B12.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda nabízí rychlé a současné stanovení klíčových vitamínů v kojenecké výživě s vysokou citlivostí a přesností. Imunoadsorpční očista účinně eliminuje maticové interferující látky a cartridge flow cell zvyšuje detekční limity.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj modulárních LC-DAD systémů s delšími optickými cestami v detektoru slibuje další zlepšení citlivosti. Kombinace s LC-MS/MS může poskytnout dodatečnou selektivitu a umožnit simultánní analýzu širšího spektra vitamínů a doplňků stravy.

Závěr

Vyvinutá metoda pro simultánní stanovení vitamínů B7, B9 a B12 v infantní formuli prokázala vysokou citlivost, robustnost a vhodnost pro rutinní kontrolu kvality kojeneckých potravin.

Reference

1. U.S. Food and Drug Administration. Daily Value on the Nutrition and Supplement Facts Labels.
2. Cellar N.A., McClure S.C., Salvati L.M., Reddy T.M. Analytica Chimica Acta 934 (2016) 180–185.
3. R-Biopharm. Instruction Manual EASI-EXTRACT MULTI-VIT B.
4. R-Biopharm. Technical Data Sheet EASI-EXTRACT MULTI-VIT B.
5. R-Biopharm. Validation Report EASI-EXTRACT MULTI-VIT B.