Simultaneous Detection and Quantitation of 14 Water-Soluble Vitamins in a Supplement by LC/MS/MS Triple-Quadrupole

Význam tématu

Voda rozpustné vitamíny skupiny B hrají klíčovou roli v metabolismu, přeměně potravy na energii a správné funkci nervového systému. Přesné stanovení těchto vitamínů je důležité pro ověřování kvality doplňků stravy, dodržování regulačních požadavků a správné označování výživových hodnot. Tradiční mikrobiologické a LC-UV metody často nedostačují, proto se stále častěji využívá LC/MS/MS pro vysokou citlivost, selektivitu a rychlost analýzy.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou, citlivou a přesnou metodu pro simultánní stanovení 14 vitamínů B v komplikované matrici multivitaminových tablet. Použit byl Agilent 1290 Infinity II LC systém spojený s Agilent 6470 triple-quadruplem a softwarovým prostředím MassHunter. Studie zahrnovala optimalizaci extrakce, chromatografie, detekce a kvantifikace v jednom analytickém běhu.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky tablet byly rozemlety a extrahovány v roztoku 0,1 % H3PO4, 5 % acetonitrilu, 0,5 % EDTA a 0,5 % kyseliny askorbové. Po zahřátí na 90–95 °C, odstředění a ředění byl vzorek injikován (1 µl) do kolony Agilent InfinityLab Poroshell 120 Phenyl-Hexyl (3,0×100 mm, 2,7 µm). Chromatografie probíhala gradientem vodné fáze s 5 mM formiátu amonného a metanolové fáze s 0,1 % kyseliny formiové při průtoku 0,5 ml/min po dobu 9 minut. Detekce proběhla v režimu dynamického MRM na Agilent 6470 s AJS ESI ionizací.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC (multisampler, pumpa, termostat)
• Agilent 6470 triple quadrupole LC/MS
• Agilent MassHunter Workstation v. 10.1 (acquisition) a v. 10.0 (qualitative analysis)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu v rozsahu 0,5–500 ng/ml pro většinu vitamínů s koeficientem determinace R² > 0,99. Postspike recoveries a standard addition přístupy kompenzovaly matrixové efekty (ionizační potlačení či zvýraznění) a výsledky korektně odrážely skutečné koncentrace. Ve vzorku Nature’s Way Alive! Men’s Max Potency byly všechny vitamíny B ve stanovených množstvích objemem dávky ≥ 100 % deklarované hodnoty. Recoveries se pohybovaly mezi 70 a 130 % dle analyzovaného vitamínu.

Přínosy a praktické využití metody

• Simultánní analýza 14 vitamínů v jediném běhu šetří čas a náklady.
• Vysoká citlivost a selektivita zajišťují spolehlivé výsledky i v komplexních maticích.
• Metoda vhodná pro rutinní QC laboratoře a tvorbu nutričních štítků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metodiky na jiné typy doplňků (kapsle, gely, nápoje).
• Automatizace přípravy vzorků pro vyšší throughput.
• Použití vysoce rozlišených hmotnostních analyzátorů pro komplexnější screening.
• Vývoj univerzálních metod pro více skupin mikronutrientů.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda s dynamickým MRM je účinným nástrojem pro rychlé a přesné stanovení kompletní řady vodou rozpustných vitamínů B v doplňcích stravy. Metoda splňuje požadavky na linearitu, specificitu a přesnost a je vhodná pro kvalitativní i kvantitativní analýzu v průmyslovém i akademickém prostředí.

Reference

1. Kennedy DO. B Vitamins and the Brain: Mechanisms, Dose and Efficacy—A Review. Nutrients 2016, 8, 68-96.
2. Henderson JW Jr, Long WJ. Exceptional Selectivity of Agilent ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl Columns to Separate Estrogens. Agilent Technologies application note 5989-9130EN, 2008.
3. Zhao H, Zulkoski J, Mastovska K. Development and Validation of a Multiclass, Multiresidue Method for Veterinary Drug Analysis in Infant Formula and Related Ingredients Using UHPLC-MS/MS. J Agric Food Chem 2017, 65(30), 7268-7287.
4. Nature’s Way. Alive! Max Potency Men’s Daily Multivitamin, Product Catalog 2020.