Automated liquid-liquid extraction (LLE) of forensic drugs from plasma

Význam tématu

Liquid–liquid extraction je zásadní krok v bioanalytické chemii a forenzní analýze pro selektivní izolaci cílových látek z komplexních biologických matric, jako je lidská plazma. Automatizace této techniky minimalizuje chyby operátora, zvyšuje reprodukovatelnost výsledků a umožňuje zpracování vysokého počtu vzorků v krátkém čase.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo vyvinout a optimalizovat plně automatizovaný postup LLE na platformě Agilent Sample Prep WorkBench pro stanovení forenzních léků v plazmě. Studie zahrnovala screening různých pH pufrů a poměrů organických rozpouštědel, stanovení citlivosti metody, linearity kalibrační křivky a ověření reprodukovatelnosti při velkých sériích vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

Byla použita automatická platforma Agilent 7696A Sample Prep WorkBench pro míchání, vortexování, separaci a ředění extrakčních fází. Po extrakci se vzorky analyzovaly na Agilent 1290 Infinity LC systém spojeném s Agilent 6490 Triple Quadrupole LC/MS. Externě se prováděla centrifugace a rotační odpařování. Pro kalibraci byly připraveny sériové ředění standardů (1–2000 pg/mL).

Hlavní výsledky a diskuse

Screening 33 kombinací tří pH pufrů (pH 3, 7, 10) a jedenácti poměrů hexan/ethylacetát ukázal, že nejvyšší signál a selektivita je dosažena při pH 10 a poměru 10 % hexan/90 % ethylacetát. Metoda vykazovala linearitu kalibrační křivky s R2 > 0,99 a dolní hranici kvantifikace 1 pg/mL. Při extrakci 50 plazmových vzorků dosáhla metodika RSD 6,4 %. Použití 2 mL skleněných vialek minimalizovalo únik leachables ve srovnání s plastovými mikrozkumavkami.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaná LLE na WorkBench přináší vysokou citlivost, standardizaci a rychlost zpracování. Metoda je vhodná pro rutinní bioanalytické a forenzní laboratoře, kde je kladen důraz na kvalitu, minimalizaci manuálních kroků a robustnost.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření plně automatizovaných end-to-end platforem kombinujících extrakci, separaci a detekci. Dalším směrem je aplikace metody na širší spektrum analyty, miniaturizace extrakčních postupů a integrace s vysoce výkonnou hmotnostní spektrometrií pro klinické a forenzní účely.

Závěr

Automatizovaná LLE metodika na Agilent 7696A WorkBench v kombinaci s Agilent 1290 Infinity LC a 6490 Triple Quadrupole MS představuje vysoce reprodukovatelný, citlivý a praktický postup pro analýzu forenzních léků v plazmě, vhodný pro vysokou průtokovost a přísné QA/QC požadavky.

Reference

• Guowen Liu et al. Strategy of Accelerated Method Development for High-Throughput Bioanalytical Assays Using Ultra High-Performance Liquid Chromatography Coupled with Mass Spectrometry. Anal. Chem. 2009, 81, 9225–9232.