Rapid Confirmation of GLP-1 Analog (Liraglutide) Using Agilent InfinityLab LC/MSD iQ

Význam tématu

Peptidové léky GLP-1 analogy, jako liraglutid, jsou klíčové při léčbě diabetu, ale vyžadují spolehlivou kontrolu kvality a potvrzení molekulové hmotnosti.
Rychlá a přesná analýza intact MS u těchto biotechnologických produktů je zásadní pro vývoj i rutinní QA/QC.

Cíle a přehled studie / článku

Cíle studie:

1. Optimalizovat chromatografické podmínky (kyselé modifikátory, výběr kolony) pro separaci liraglutidu a jeho nečistot.
2. Ověřit vhodnost kyselin TFA, DFA a FA pro HPLC–MS detekci.
3. Potvrdit molekulovou hmotnost intact liraglutidu na Agilent InfinityLab LC/MSD iQ s dekonvolucí spektra v OpenLab CDS.

Použitá metodika a instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II Bio Prime LC se systémem Quick Change Valve pro rychlou výměnu kolony.
• Kolony AdvanceBio Peptide Mapping, AdvanceBio Peptide Plus a Poroshell 120 Aq-C18 (2,1×150 mm, 2,7 μm).
• Mobilní fáze: 0,1 % TFA, DFA, FA ve vodě a v acetonitrilu.
• Agilent InfinityLab LC/MSD iQ (ESI+, skenování do 1 450 m/z, fragmentor 150 V).
• Software OpenLab CDS 2.8 pro dekonvoluci spekter.

Hlavní výsledky a diskuse

• TFA přinesla nejlepší UV separaci, ale potlačuje ionizaci v MS.
• DFA zajistila ostré chromatografické vrcholy i vysokou citlivost v MS.
• FA vykázala horší symetrii píku a rozlišení.
• AdvanceBio Peptide Mapping s DFA poskytuje optimální kompromis pro nízké koncentrace (10 μg/mL).
• Dekonvoluce potvrdila hmotnost 3 750,23 Da shodnou s teoretickou hodnotou.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá implementace metod díky Quick Change Valve a flexibilním pumpám.
• Spolehlivé potvrzení intact MS v raných i pozdních fázích vývoje i pro rutinní QC.
• Možnost screeningové analýzy nečistot a degradačních produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace a vyšší propustnost pro sériové analýzy peptidů.
• Integrace databází dekonvolučních algoritmů a AI pro rychlejší identifikaci.
• Rozšíření na větší proteiny a biopolymery s vyšším rozlišením.

Závěr

Kombinace Agilent InfinityLab LC/MSD iQ a OpenLab CDS umožňuje rychlou a přesnou konfirmaci molekulové hmotnosti liraglutidu.
Optimalizace chromatografie a MS modifikátorů zajišťuje rovnováhu mezi rozlišením a citlivostí.

Reference

• U.S. FDA Guideline on ANDAs for Synthetic Peptides, 2021.
• EMA Guideline on Synthetic Peptides, 2023.
• Brian R., Jarod G., Unit Mass Spectral Deconvolution for Molecular Weight Confirmation of Large Molecules, Agilent, 2024.
• Marschner B., Wang L., Simplify Method Development Using Agilent 1260 Infinity II Prime LC and InfinityLab LC/MSD iQ, Agilent, 2020.