Peptide Drug Stability Analysis Using Agilent InfinityLab LC/MSD and OpenLab CDS Deconvolution

Význam tématu

Analýza stability peptidových léčiv je klíčová pro zajištění jejich bezpečnosti a účinnosti, zejména s ohledem na rizika imunogenicity vzniklé peptidovými nečistotami. Regulace FDA vyžaduje přísné sledování a kvantifikaci těchto produktů degradace pro schválení ANDA.

Cíle a přehled studie

Tato studie demonstrovala aplikaci Agilent InfinityLab LC/MSD (iQ a XT) spolu s OpenLab CDS 2.8 dekonvolucí k identifikaci a měření produktů degradace GLP-1 agonistů Liraglutidu a Semaglutidu vystavených zrychleným kyselým, zásaditým a oxidačním podmínkám.

Použitá instrumentace

• LC: Agilent 1260 Infinity II Prime Bio (pumpa, multisampler, termostat, DAD HS, 60 mm cell)
• MS: Agilent InfinityLab LC/MSD iQ a XT, ESI(+), rozsah 300–1450 m/z
• Kolony: AdvanceBio Peptide Mapping 2.1×150 mm 2.7 μm; InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 2.1×100 mm a 2.1×150 mm 1.9 μm
• Software: Agilent OpenLab CDS v2.8 s dekonvolučním modulem
• Reagencie: 0.1 % DFA, HCl, NaOH, H₂O₂, ACN

Použitá metodika

Liraglutid (1 mg/mL ve vodě) a Semaglutid (1 mg/mL v 30 % ACN) byly inkubovány při 60–80 °C v kyselém (0.1 M HCl), zásaditém (0.1 M NaOH) a oxidačním (0.2 % H₂O₂) prostředí. Po definovaných intervalech byly vzorky neutralizovány a analyzovány gradientní RP‐HPLC s UV 280 nm a MS TIC scanem. Dekonvoluce umožnila stanovení přesných molekulových hmotností impurit.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace gradientu a kombinace sloupců EC‐C18 vedla k lepšímu rozlišení nečistot. Forced degradation Liraglutidu prokázalo odlišné profily produktů degradace podle podmínek, přičemž dekonvoluce potvrdila hlavní impurity s rozdíly v molekulové hmotnosti až o stovky daltonů oproti matričnímu peptidu. Semaglutid vykázal obdobné chování s dominantním píkem na ~4 113 Da a sekundárními produkty

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje flexibilní a uživatelsky přívětivý přístup k identifikaci a kvantifikaci degradovaných produktů peptidových léčiv. Vhodná je pro vývoj, kontrolu kvality i stabilitní studie, zajišťuje splnění požadavků FDA.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat nasazení vysoce výkonné UHPLC a MS s vyšším rozlišením, automatizaci dekonvoluce a integraci strojového učení pro urychlení identifikace a predikci degradací peptidů.

Závěr

Agilent InfinityLab LC/MSD iQ a XT ve spojení s OpenLab CDS 2.8 dekonvolucí představují robustní platformu pro stanovení molekulových hmotností a profilování degradací GLP-1 agonistů. Tento přístup zajišťuje vysokou kvalitu dat a podporuje regulatorní shodu.

Reference

• ANDAs for Certain Highly Purified Synthetic Peptide Drug Products… FDA CDER, 2021
• Ame S. a kol. Influence of Production Process and Scale on Quality of Polypeptide Drugs: a Case Study on GLP-1 Analogs. Pharm. Res. 2020;37:120
• Brian R., Jarod G. Unit Mass Spectral Deconvolution for Molecular Weight Confirmation of Large Molecules. Agilent Technologies, 2024