MALDI HiPLEX-IHC Imaging of FFPE Human Kidney Tissue at 5 μm utilizing microGRID on timsTOF fleX MALDI-2

Význam tématu

Matrix assisted laser desorption ionization (MALDI) HiPLEX-IHC imaging představuje inovativní přístup pro prostorové mapování intaktních proteinů v parafínem zafixovaných (FFPE) tkáních s vysokým prostorovým rozlišením. Schopnost zobrazit více než 200 proteinů přímo v tkáňovém kontextu usnadňuje studium histologických struktur a interakcí buněk v mikroprostředí.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo demonstrovat využití workflow MALDI HiPLEX-IHC ve spojení s microGRID technologií na přístroji timsTOF fleX MALDI-2 pro zobrazování proteinů v lidské ledvinové tkáni FFPE s rozlišením 5 µm a porovnat jej s konvenčním měřením při 20 µm.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava FFPE vzorků: odparafinace v xylenu, rehydratace, antigenová obnova, blokace nespecifických vazeb.
• Imunobarvení: nanesení protilátek označených fotolabilními peptidovými tagy, inkubace při 4 °C přes noc.
• Uvolnění peptidových tagů: UV osvětlení následované aplikací CHCA matrice a rekrystalizací.
• Měření: timsTOF fleX MALDI-2 s microGRID pro rozlišení 5 µm; komparační snímky při 20 µm.
• Datová analýza: vizualizace ve SCiLS Lab s integrovaným hematoxylinem a eosinem a odbornou histopatologickou anotací.
• Instrumentace:
  • timsTOF fleX MALDI-2 s microGRID
  • SCiLS Lab software

Hlavní výsledky a diskuse

• První experiment s protilátkami proti Vimentinu, Histonu H2A a ATPase-1A1 ukázal jasné lokalizační vzory na 20 µm i 5 µm bez striping artefaktů.
• Druhá fáze zahrnující také markery CD68 a kolagenu 1A1 potvrdila škálovatelnost multiplexingu na sériových řezech, s konzistentní korespondencí s histopatologickou anotací glomerul, proximálních tubulů, makrofágů a fibrilárního kolagenu.
• Výsledná data demonstrovala vysokou přesnost a artefakt-free obraz poskytovaný mikroGRID technologií.

Přínosy a praktické využití metody

• Detailní zobrazení buněčných interakcí v mikroprostředí díky rozlišení 5 µm.
• Možnost současné analýzy stovek proteinových markerů urychluje výzkumné i QA/QC procesy.
• Workflow kompatibilní se standardními FFPE laboratorními postupy.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu markerů pro onkologii, neurovědy a imunologie.
• Integrace s dalšími omickými technologiemi a pokročilými algoritmy umělé inteligence pro detailní mapování heterogenity tkání.
• Automatizace přípravy vzorků a analýzy pro vyšší propustnost dat a větší reprodukovatelnost.

Závěr

Propojení MALDI HiPLEX-IHC workflow s microGRID technologií na timsTOF fleX MALDI-2 nabízí robustní platformu pro vysoce rozlišené a multiplexní zobrazování proteinů ve FFPE tkáních. Tato metoda otevírá nové možnosti pro detailní studium buněčných interakcí a biomarkerových studií v biomedicínském výzkumu.

Reference

V původním textu nebyly uvedeny žádné explicitní literární reference.