Determination of Nitrosamine Impurities Using the Agilent 6495D Triple Quadrupole LC/MS System

Význam tématu

Nitrosaminy jsou genotoxické nečistoty vznikající v stopových množstvích během výroby farmaceutik. Díky svému pravděpodobnému karcinogennímu účinku je nezbytné sledovat jejich koncentrace na úrovni ppt, aby byla zajištěna bezpečnost pacientů a splněny přísné regulatorní požadavky.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit výkon Agilent 6495D Triple Quadrupole LC/MS spojeného s Agilent 1290 Infinity II Bio LC a APCI zdrojem pro kvantifikaci osmi nitrosaminných nečistot (NDMA, NMOR, NMEA, NPYR, NDEA, NPIP, NDPA, NDBA) ve vzorcích čistého rozpouštědla i losartanového API.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny spikováním standardů do blanku (methanol:voda 10:90) a do extraktu losartanového API (100 mg API v MeOH:voda 50:50, sonikace, centrifugace, naředění 1:5) v koncentracích 0,005–20 ng/mL.

• Agilent 1290 Infinity II Bio LC: vysokorychlostní pumpa, multisampler s termostatem, multikolonový termostat.
• Kolona InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (3,0×150 mm, 2,7 µm), mobilní fáze A: voda+0,1 % HCOOH, B: MeOH+0,1 % HCOOH, gradient 5–90 % B, průtok 0,5 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 20 µL.
• Agilent 6495D Triple Quadrupole LC/MS s APCI zdrojem v pozitivním režimu: teplota zdroje 300 °C, vaporizer 350 °C, proud sušícího plynu 7 L/min, MRM v iFunnel fragilním režimu, lineární kalibrace s vážením 1/x.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytla vynikající chromatografické rozlišení a tvar píků pro všech osm analyzovaných nitrosaminů. Linearita kalibračních křivek byla velmi vysoká (R2 > 0,99), limit kvantifikace (LLOQ) dosahoval úrovně ≤ 0,01 ng/mL (10 ppt) s přesností 80–120 % a opakovatelností RSD < 20 %. Ve vzorcích losartanového matrixu bylo možné spolehlivě detekovat a kvantifikovat koncentrace již od 0,03 ng/mL, přičemž signál-šum u NDMA dosáhl hodnot > 20 a zachoval excelentní reprodukovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Popisovaná metoda umožňuje rutinní monitorování nitrosaminových nečistot v blocích ARB léčiv s vysokou citlivostí a spolehlivostí. Splňuje požadavky FDA a EMA na kontrolu genotoxických nečistot a je vhodná pro implementaci v rámci QA/QC laboratoří farmaceutického průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být rozšířena na další farmaceutická API a složité matrixy. Výhledově se nabízí kombinace s vysokorozlišovacím MS pro screening širšího spektra genotoxických kontaminantů, automatizované přípravné systémy a adaptace jiných ionizačních technik pro rozšíření analytického pokrytí.

Závěr

Agilent 6495D TQ LC/MS v kombinaci s 1290 Infinity II Bio LC a APCI zdrojem prokázal schopnost kvantifikovat osm klíčových nitrosaminů v čistém i matrix vzorku na úrovni ppt s vynikající linearitou, přesností a reprodukovatelností. Metoda je plně použitelná pro kontrolu kvality farmaceutických produktů a odpovídá nejpřísnějším regulatorním standardům.

Reference

1. US Food and Drug Administration. FDA updates and press announcements: Angiotensin II receptor blocker (ARB) recalls: valsartan, losartan. 2023.
2. US Food and Drug Administration. Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs: Guidance for Industry. Updated 24 February 2021.
3. European Medicines Agency. Assessment Report: Nitrosamines Impurities in Human Medicinal Products. Procedure number EMEA/H/A-5(3)/1490, 25 June 2020.