Determination of Nitrosamine Impurities Using the Agilent 6475 Triple Quadrupole LC/MS System

Význam tématu

Nitrosaminy jsou potenciálně genotoxické nečistoty vznikající v stopových množstvích při výrobě léčiv, zejména sartanu (ARB). Regulace jejich hladin v konečných produktech je klíčová pro minimalizaci karcinogenního rizika při dlouhodobé expozici.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit kvantifikační výkonnost osmi reprezentativních nitrosaminů (NDMA, NDEA, NMOR, NMEA, NPYR, NPIP, NDPA, NDBA) za použití Agilent 6475 triple kvadrupólového LC/MS v kombinaci s Agilent 1290 Infinity II Bio LC systémem a zdrojem APCI.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II Bio LC: vysokorychlostní pumpa (G7132A), multisampler s termostatem (G7137A), multikolonový termostat (G7116B)
• Agilent 6475 Triple Quadrupole LC/MS (G6475AA) vybavený APCI zdrojem (G1947B)
• Software Agilent MassHunter Workstation 12.0 pro akvizici a zpracování dat

Použitá metodika

Chromatografie probíhala na koloně Poroshell 120 EC-C18 (3,0 × 150 mm, 2,7 µm) s gradientem vody a methanolu (každá fáze s 0,1 % kyseliny mravenčí) při 0,5 mL/min a teplotě kolony 40 °C. APCI zdroj v pozitivním režimu s MRM časovými segmenty umožnil selektivní detekci. Kalibrace (0,0125–10 ng/mL) v lineárním režimu s vážením 1/x. Příprava vzorků zahrnovala rozpuštění losartanové matrice, odstředění, ředění a spiknutí standardy.

Hlavní výsledky a diskuse

• Vynikající chromatografické rozlišení a symetrie píků pro všechny analyty.
• LLOQ ≤ 0,025 ng/mL se signál-šum >10 a přesností (%RSD) pod 20 %.
• Lineární rozsah s R2 > 0,99 pro každý nitrosamin.
• Úspěšná kvantifikace všech osmi látek v losartanové matrici při 0,05 ng/mL s vysokou reprodukovatelností a S/N nad požadovanými limity.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda splňuje požadavky regulačních úřadů (FDA, EMA) na kontrolu nitrosaminů v ARB lécích. Je vhodná pro rutinní QA/QC a výzkumné aplikace v průmyslu farmaceutické výroby.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na další farmaceutické matrice a nové skupiny genotoxických nečistot.
• Automatizace přípravy vzorků a vysokoprůtokové LC/MS platformy pro vyšší propustnost.
• Integrace s vysokorozlišovacími technikami (HRMS) pro potvrzovací analýzy.
• Očekávané aktualizace regulačních limitů a metodických doporučení.

Závěr

Agilent 6475 LC/TQ s APCI a Agilent 1290 Infinity II Bio LC prokázal vysokou citlivost, přesnost i lineárnost kvantifikace osmi nitrosaminů na úrovni pikogramů. Metoda je plně použitelná pro sledování těchto nečistot v ARB lécích podle současných regulačních požadavků.

Reference

1. U.S. Food and Drug Administration. FDA Updates and Press Announcements on Angiotensin II Receptor Blocker (ARB) Recalls. Last revised March 2023.
2. Center for Drug Evaluation and Research, U.S. Food and Drug Administration. Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs: Guidance for Industry. Last revised February 2021.
3. European Medicines Agency. Procedure under Article 5(3) of Regulation EC No 726/2004: Nitrosamines Impurities in Human Medicinal Products. Last revised June 2020.