SOFT: CONFIRMATION OF CANNABINOIDS IN FORENSIC TOXICOLOGY CASEWORK BY ISOMER-SELECTIVE UPLC-MS/MS

Význam tématu

Potvrzení užití kanabinoidů v toxikologii je kritické pro forenzní a klinickou praxi, zejména s rostoucí dostupností CBD produktů obsahujících psychoaktivní isomery Δ8-THC, Δ9-THC a Δ10-THC. Standardní testy cílené pouze na metabolit Δ9-cTHC již nejsou dostatečně selektivní, což vede k falešně pozitivním či nevypovídajícím výsledkům. Vysoce selektivní metody umožňují rozlišení isomerů a přesnou kvantifikaci, což zvyšuje spolehlivost soudně-toxikologických rozborů.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na vývoj a validaci izomerově selektivní UPLC-MS/MS metody pro kvantitativní potvrzení izomerů Δ8-THC, Δ9-THC, Δ10-THC a jejich karboxylových metabolitů (včetně Δ9-cTHC) a CBD v moči.
Porovnání s konvenční metodou pouze pro Δ9-cTHC probíhalo na 39 anonymizovaných kazuistikách, přičemž dále bylo analyzováno dalších 220 reálných vzorků pro stanovení prevalence isomerů.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnuje enzymatickou hydrolýzu moče, precipitaci proteinu a přímou analýzu UPLC-MS/MS:

• Instrumentace: Waters ACQUITY UPLC I-Class (FTN), Xevo TQD MS detektor
• Kolona: Waters CORTECS C18+ 2,1×50 mm, 1,6 µm
• Mobilní fáze: 0,1% formic acid ve vodě / acetonitril, gradient 55–95 % B v 5,5 min
• MRM režim pro jednotlivé isomery a vnitřní standardy (Δ9-THC-D3, Δ9-cTHC-D3, CBD-D3)

Validace zahrnovala linearitu 10–1000 ng/mL, LOD 4 ng/mL, přesnost a přesnost v intervalu 4–800 ng/mL, matrix efekt a nespecifické přenosy (<0,03 %).

Hlavní výsledky a diskuse

Izomerově selektivní metoda prokázala vysokou chromatografickou resoluci blízkých isomerů s dobou analýzy 5,5 min. Precision (%CV) byla nižší než 15 % pro QC a LOD, bias do 15 %. Matrix efekt se pohyboval v rozmezí –12 % až +32 %, kompenzovaný izotopovými standardy.
Porovnání s předchozí metodou (prior confirmation) odhalilo významné chromatografické interferenční vrcholy, které znemožňovaly spolehlivé stanovení Δ9-cTHC. Korelace mezi metodami potvrdila shodu kvantifikace Δ9-cTHC (r2 > 0,99).
V 220 reálných případech byla zjištěna prevalence Δ9-cTHC 98,6 %, Δ8-cTHC 13,6 % a CBD 10 %. U uživatelů Δ8-THC bylo ve 90 % sekundárně detekováno Δ9-cTHC, což nasvědčuje společné expozici isomerům. Procento glukuronidace bylo podobné pro Δ8-cTHC i Δ9-cTHC (r = 0,94), naznačující obdobnou enzymatickou metabolizaci.

Přínosy a praktické využití metody

Izomerově selektivní UPLC-MS/MS metoda poskytuje:

• Přesné rozlišení a kvantifikaci psychoaktivních kanabinoidních isomerů
• Spolehlivou forenzní identifikaci bez falešné interference
• Rychlou analýzu vhodnou pro vysokokapacitní laboratorní provoz

Metoda podporuje soudní a klinickou toxikologii při potvrzení užití legálních i nelegálních kanabinoidů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření spektra analyzovaných kanabinoidů, včetně nových syntetických derivátů. Integrace HRMS pro strukturální potvrzení a automatizované workflow umožní rychlejší nasazení ve forenzních laboratořích. Využití multireziduální analýzy přispěje ke sledování trendů užívání a zpřesnění metabolických studií.

Závěr

Představená izomerově selektivní UPLC-MS/MS metoda prokazatelně zvyšuje selektivitu a přesnost při potvrzení kanabinoidů v moči. Validace potvrdila rutinní použitelnost pro forenzní a klinickou toxikologii, včetně detekce a kvantifikace nových THC isomerů, což je klíčové pro správnou interpretaci výsledků a rozhodování ve forenzní praxi.

Reference

• Current Protocols e644, Volume 3, 2023, doi:10.1002/cpz1.644
• J Anal Toxicol 2022;46:743