Euromedlab: CONFIDENCE IN YOUR CALIBRATORS: ASSESSMENT OF MASSTRAK™ ENDOCRINE CALIBRATOR AND CONTROL SETS

Význam tématu

Analýza steroidních hormonů je nezbytná pro diagnostiku a sledování metabolických drah ovlivňujících pohlavní charakteristiky, zánětlivé procesy a regulaci krevního tlaku.
Technika LC-MS/MS přináší v oblasti steroidní analýzy výrazné zlepšení citlivosti, selektivity a umožňuje simultánní kvantifikaci více látek v jediném běhu.
Nedostatek standardizace a harmonizace kalibrátorů mezi laboratořemi však omezuje srovnatelnost výsledků a vyžaduje zavedení metrologicky kompatibilních řešení.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo ověřit výkonnost sady MassTrak Endocrine Steroid Calibrator a Quality Control (QC) Sets (IVD) z hlediska přesnosti, opakovatelnosti a souladu s metrologickými standardy ISO 15189.
Studie využila interně vyvinutou metodu LC-MS/MS k:

• Určení preciznosti a repeatability kalibrátorů a QC sad.
• Posouzení lineárnosti kalibračních křivek a analytické citlivosti.
• Ověření biasu metody pomocí EQA vzorků z UK NEQAS.

Použitá metodika

Vzorky: 125 µl séra.
Příprava vzorků: Přidání interního standardu, metanolu a vody, promíchání a centrifugace.
Extrakce: Oasis MAX µElution destička – mytí 1% kyselinou mravenčí v 10% acetonitrilu, 1% amoniakem v 10% acetonitrilu, eluace 60% vodného acetonitrilu, doplnění pufrem 50 mM amonného bikarbonátu pH 7,4 pro zlepšení tvaru píku DHEAS.
Chromatografie: Waters ACQUITY UPLC I-Class s CORTECS C8 kolonu (2,1 x 100 mm), gradient metanol/voda s 0,1 mM amonným fluoridem.
Detekce: Waters Xevo TQ-S micro, ESI pozitivní i negativní v režimu multiple reaction monitoring, doba analýzy ~7 minut na vzorek.
Preciznost a repeatability: 5 replikátů denně po dobu 5 dnů (n=25) s CV ≤7,7 %.
Bias EQA: vnější kontrolní vzorky bias ≤±7,8 % pro hlavní steroidy.

Použitá instrumentace

Waters ACQUITY UPLC I-Class systém
Waters CORTECS C8 kolona 2,1 x 100 mm s in-line filtrem
Waters Xevo TQ-S micro hmotnostní detektor
Oasis MAX µElution destičky

Hlavní výsledky a diskuse

Baseline separace všech 12 steroidů (včetně izomerů) byla dosažena na C8 kolonu.
Analytická citlivost pro nejnižší kalibrátor vykázala poměr signál/šum (PtP) >10 pro všechny analyty.
Linearity kalibračních křivek byla výborná (r2 >0,994) napříč rozsahem koncentrací.
QC přesnost se pohybovala v rozsahu 91,0–112,4 % při třech úrovních koncentrací.
Metoda prokázala dobrou shodu s externími EQA vzorky z UK NEQAS.

Přínosy a praktické využití metody

Sady MassTrak poskytují metrologicky zdůvodnitelné kalibrátory a QC materiály, podporující soulad s normou ISO 15189.
Předpřipravené lyofilizované sérové materiály šetří čas a laboratorní zdroje oproti vlastní gravimetrické přípravě.
Zajišťují stabilitu a konzistentní výkon mezi výrobními šaržemi, což usnadňuje monitoring kvality a validaci metod.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření spektra sledovaných hormonů a metabolitů v rámci jedné analýzy.
Automatizace přípravy vzorků a integrace s laboratorními informačními systémy pro vyšší throughput.
Vývoj univerzálních kalibrátorů a QC sad pro různé biologické matice (plasma, sliny, moč).
Použití standardizovaných materiálů k harmonizaci výsledků napříč laboratořemi a studiemi.

Závěr

MassTrak Endocrine Steroid Calibrator a QC Sets nabízejí robustní a ověřené řešení pro standardizovanou analýzu steroidních hormonů pomocí LC-MS/MS.
Metrologická stopa, konzistentní kvalita a jednoduchá příprava materiálů přispívají k vyšší spolehlivosti výsledků a efektivitě laboratorních procesů.