Method Robustness Testing Using Empower™ Method Validation Manager Software Aided by the Empower Sample Set Generator to Automate Method Creation

Význam tématu

Robustnost chromatografických metod představuje schopnost nezměněného výkonu při drobných odchylkách provozních podmínek. V praxi zaručuje opakovatelnost a spolehlivost výsledků v rutinním provozu, minimalizuje riziko nevyhovujících analýz a podporuje kvalitu farmaceutických a průmyslových měření.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na hodnocení robustnosti UHPLC metody pro stanovení naphazolini hydrochloridum, pheniraminu a jejich příbuzných látek. Pomocí Empower Method Validation Manager (MVM) a Empower Sample Set Generator (SSG) byly automatizovány experimentální návrh a spuštění 16 chromatografických běhů v plném faktoriálním DoE (4 faktory, 2 hladiny).

Použitá metodika a instrumentace

Analytický systém:

• UHPLC Arc Premier System s aktivním předehřevem sloupce a PDA detektorem nastaveným na 260 nm
• Kolona XSelect Premier CSH C18 (4,6×150 mm, 2,5 µm), teplota 44 °C
• Přístrojové chlazení vzorků na 10 °C, injekční objem 5 µL
• Mobile phase A: 0,1 % kyselina formiová ve vodě; Mobile phase B: 0,1 % kyselina formiová v methanolu; průtok 1,2 mL/min
• Software pro řízení a vyhodnocení: Empower 3 FR5 SR5, moduly MVM a SSG

Hlavní výsledky a diskuse

DoE ukázalo, že klíčovými faktory ovlivňujícími rozlišení kritické dvojice píků byly:

• Teplota kolony (negativní vliv na rozlišení při nárůstu nad 44 °C)
• Průtok mobilní fáze (pozitivní vliv při zvýšení)

Ostatní faktory (% organiky na začátku a na konci gradientu) měly menší nebo smíšený dopad. V třech z šestnácti experimentů (<1.5 USP resolution) došlo k nedostatečnému rozlišení hlavní složky naphazolini. Empower MVM efektové grafy vizualizovaly jednotlivé a interakční vlivy.

Přínosy a praktické využití metody

Multivariační přístup s automatizací SSG:

• Úspora času a eliminace chyb při ručním nastavování sekvencí
• Rychlá identifikace kritických parametrů a definice akceptovatelných rozsahů
• Podpora tvorby robustních protokolů validace a kontrolní strategie

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření multivariačních DoE přístupů s umělou inteligencí pro automatické doporučování optimálních podmínek. Digitální integrační platformy umožní centralizovanou správu metod a širší automatizaci validací v souladu s požadavky regulátorů.

Závěr

Studie prokázala schopnost Empower MVM a SSG usnadnit komplexní robustnostní testování metod. Identifikace klíčových parametrů a automatizované generování běhů zajistily efektivní definici provozních podmínek pro spolehlivé rutinní použití.

Reference

• U.S. FDA. Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics Guidance for Industry. 2015.
• ICH Q14. Analytical Procedure Development, 31 Mar 2022.
• Swartz ME, Krull IS. Method Validation and Robustness. LCGC NA, Vol 24, Issue 5, May 2006.
• Maziarz M, Rainville P. Efficient Method Development Using Systematic Screening Protocol. Waters App Note, 2023.
• Maziarz M, Wrona M, McCarthy SM. Increasing Efficiency of Method Validation with Empower 3 MVM. Waters App Note, 2018.
• Empower Sample Set Generator. Waters Support Document.