Ternary Gradient for Tenofovir Disoproxil Fumarate Impurity Profiling

Význam tématu

Profilování organických nečistot v léčivé látce tenofovir disoproxil fumarátu je klíčové pro zajištění bezpečnosti a účinnosti přípravku. Rychlé a spolehlivé metody s kompatibilitou pro hmotnostní spektrometrii umožňují efektivní kontrolu kvality během vývoje a rutinní výroby antiretrovirotik.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo ukázat robustní výkon systému Thermo Scientific Vanquish Flex UHPLC při použití tříkomponentního gradientu, který začíná na 100 % vodné fázi bez organického rozpouštědla. Metoda vychází z monografie USP pro TDF, avšak byla upravena pro kratší dobu analýzy a kompatibilitu s MS.

Použitá metodika a instrumentace

Popis chromatografických podmínek:

• Kolona: Accucore aQ, 2,6 µm, 2,1×100 mm
• Mobilní fáze A: 25 mM acetát amonný, pH 3,8
• Mobilní fáze B: methanol
• Mobilní fáze C: acetonitril
• Gradient: 0–4 min 0→70 % B, 0→15 % C; 4–4,5 min izokraticky; 4,5–5 min B 70→25 %, C 15→70 %; 5–6 min izokraticky; 6–6,1 min návrat na výchozí; 6,1–15 min ekvilibrace
• Průtok 0,6 mL/min, teplota 40 °C
• Objem injekce 1 µL, detekce při 260 nm
• Software: Chromeleon 7.2 SR3

Použitá instrumentace

• Vanquish Flex UHPLC System – základní modul
• Quaternary Pump F
• Split Sampler FT
• Column Compartment H s aktivním předehřevem
• Diode Array Detector HL s LightPipe Flow Cell

Hlavní výsledky a diskuse

Aplikace tříkomponentního gradientu na Accucore aQ kolonu vedla k rozlišení kritických látek adeninu a tenofoviru s rozlišením větším než 2,0. Metoda zvládla oddělit polaritu raných a pozdních složek v čase kratším než 6 minut. Dlouhodobá opakovatelnost (60 injekcí za 15 hodin) ukázala retenční čas RSD 0,03 % a plošný RSD 0,30 %, což výrazně překračuje požadavky USP (5–10 %).

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby analýzy oproti standardním postupům (z 60 na ~6 min).
• MS kompatibilní mobilní fáze minimalizují riziko srážení solí a usnadňují přípravu elučních pufrů.
• Vysoká stabilita retenčních časů a ploch přináší důvěryhodné výsledky pro QA/QC laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Použití tříkomponentních gradientů může být rozšířeno na další polární a nepolární API. Integrace s hmotnostní spektrometrií v reálném čase a další miniaturizace kolony by mohly dále zvýšit citlivost a rychlost analýzy. Dále se očekává větší využití zelených rozpouštědel a automatizovaných systémů pro přípravu elučních složek.

Závěr

Upravená metoda pro impuritní profilování tenofoviru disoproxil fumarátu kombinuje pokročilý kolonní materiál s flexibilním UHPLC systémem. Výsledky potvrzují vynikající rozlišení, rychlost i dlouhodobou robustnost, což umožňuje efektivní a spolehlivou kontrolu kvality.

Reference

1. Authorized USP Pending Monograph for Tenofovir Disoproxil Fumarate, Version 1, USP.
2. Thermo Fisher Scientific. Vanquish UHPLC System Overview, 2015.
3. Thermo Fisher Scientific. Accucore aQ C18 Polar Endcapped LC Column, 2015.