Quantitation of tenofovir and impurities in multi-component drug products by ternary gradient reversed-phase chromatography with charged aerosol detection

Význam tématu

Polárně i hydrofobně se chovající impurity v kombinovaných antiretrovirotikách vyžadují rychlou a přesnou analýzu pro zajištění kvality léčiv. Reverzní fázová chromatografie spojená s detekcí nabitým aerosolem (CAD) umožňuje uniformní odezvu nevolatilních sloučenin bez závislosti na jejich chromoforu. Inverse gradient kompenzace dále normalizuje signál během gradientní eluční metody.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo demonstrovat:

• vliv tvorby solí při použití organických kyselin v mobilní fázi na detektorovou odezvu CAD,
• možnost aplikace inverse gradient kompenzace pro ternární gradient k dosažení jednotné odezvy sloučenin,
• porovnání kvantitativní přesnosti CAD a UV detekce při použití jediného kalibrantu.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá ternární gradient reverzní fáze s mobilními fázemi: A – voda s 0,1 % kyseliny octové (pH 3,5), B – methanol, C – acetonitril. Analytický gradient i inverse gradient jsou generovány duálním čerpadlem při průtoku 0,6 ml/min.
Kolona: Thermo Scientific Accucore aQ (2,1×100 mm, 2,6 µm), teplota 40 °C. Autosampler udržován při 4 °C, objem injekce 1 µl.
Detekce: Thermo Scientific Vanquish Charged Aerosol Detector (evaporátor 35 °C, filtr 3,6 s, 20 Hz) a UV detektor při 260 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

Bez inverse gradient kompenzace vykazovala CAD variabilitu 74 % RSD napříč analyty při 30 ng. Aplikace inverse gradient snížila RSD na 8 %. Úprava dat o hmotnost přidané octanové soli (jedna sůl na molekulu) dále zlepšila jednotnost na 7,7 % RSD. UV detekce pro srovnání dosáhla 57 % RSD. Flow injection experimenty potvrdily vliv pH a typu kyseliny na tvorbu solí a odezvu CAD.

Přínosy a praktické využití metody

• Možnost kvantifikace impurit bez nutnosti referenčních standardů díky uniformní odezvě CAD.
• Rychlá analýza (~10 minut) komplexní směsi antiretrovirotik.
• Zjednodušená validace metodik pro QA/QC v farmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření inverse gradient kompenzace na další typy složitých matric.
• Automatizace kompenzačních postupů v softwaru chromatografických datových systémů.
• Optimalizace mobilních fází s nízkomolekulárními aditivy (např. kyselina mravenčí) pro minimalizaci variability odezvy.

Závěr

Implementace ternárního gradientu s inverse gradient kompenzací a detekcí nabitým aerosolem umožňuje spolehlivou a přesnou kvantifikaci tenofoviru, emtricitabinu a jejich impurit bez nutnosti mnoha standardů. Úprava o tvorbu solí dále zvyšuje kvantitativní přesnost.

Reference

1. Fabel S. Ternary gradient for tenofovir disoproxil fumarate impurity profiling, Thermo Fisher Scientific Application Note 1129.
2. Iavanya B. et al. Method development and validation of combined tablet dosage form of emtricitabine and tenofovir disproxil fumerate by ultraviolet spectroscopy. Int. Research J. Pharm. 2012, 3(12), 104–108.
3. Menz M. et al. Charged aerosol detection — factors affecting uniform analyte response. Thermo Fisher Scientific Technical Note 72806.
4. Cohen R.D. et al. Analysis of volatile bases by HPLC with aerosol-based detection. J. Chrom. A. 2012, 1229, 172–179.