Agilent Nanospray/Nanodapter

Význam tématu

Metoda nanospray spojená s Nanodapterem umožňuje přenášet velmi nízké průtoky z kapalinové chromatografie (nanoLC) do hmotnostní spektrometrie (LC/MS) s minimálními ztrátami citlivosti. Díky vysoké reprodukovatelnosti a nízkému objemu vzorků je nanospray klíčová zejména v proteomice, metabolomice a stopových analýzách, kde je třeba detekovat nízké koncentrace biologických molekul.

Cíle a přehled publikace

Tento Quick Start Guide popisuje rychlou instalaci, konfiguraci, ověření a základní provozní postupy pro Agilent Nanospray ion source a Nanodapter. Cílem je ukázat kroky k:

• správnému sestavení LC systému s Nanodapterem,
• nastavení toku a ověřovacímu měření s kontrolními peptidy,
• zprovoznění stabilního nanospraye pro vysoko citlivou LC/MS analýzu.

Použitá metodika a instrumentace

Instalace a provoz vyžaduje:

• LC systém Agilent 1290 Infinity II nebo 1290 Infinity (Multisampler/Autosampler),
• Nanospray zdroj G1992A spolu s Nanodapterem G1988-64003,
• Sensirion Liquid Flow Viewer software a elektronický průtokový senzor,
• Q-TOF LC/MS s AJS zdrojem a přípravným setem nízkého pozadí (G1995A),
• trapping a nano kolony (PEEK potažené kapiláry Ø75 µm, délka 10–50 cm).

Hlavní výsledky a diskuse

Po sestavení systému a orientačním nastavení polohy je dosaženo

• stabilního rozstřiku při nano-průtoku ~300 nL/min za napětí 1 200–1 300 V,
• lineární závislosti nano-průtoku na čerpadlovém průtoku (0,05–0,15 mL/min),
• srovnatelných chromatografických parametrů (FWHM < 0,25 min) na HSA peptidovém standardu,
• nízkého pozadí a reprodukovatelného signálu sedmi HSA peptidů (< 1 % RSD retenčních časů).

Přínosy a praktické využití metody

Nanospray/Nanodapter kombinace poskytuje vysokou citlivost, šetří spotřebu vzorku a rozpouštědel. Výhody:

• uplatnění v proteomické identifikaci a kvantifikaci,
• možnost analýzy vzorků s nízkou koncentrací biomolekul,
• stabilní dlouhodobý provoz s nízkou frekvencí výměny jehel a minimalizací blokací.

Budoucí trendy a možnosti využití

Směřování vývoje nanospray technologií:

• integrace mikrofluidních systémů pro plně automatizovanou přípravu a analýzu,
• vylepšené materiály kapilár a jehel pro delší životnost a nižší pozadí,
• softwarová optimalizace polohy jehly a napětí pomocí umělé inteligence,
• rozšíření aplikací do klinické diagnostiky a environmentálních analýz.

Závěr

Agilent Nanospray spolu s Nanodapterem a Sensirion senzorem poskytují robustní a citlivé rozhraní nanoLC-MS. Dodržení postupů instalace, kalibrace průtoku a ověření pomocí kontrolních peptidů garantuje reprodukovatelné výsledky a dlouhodobou stabilitu rozstřiku.

Reference

• Agilent Nanospray/Nanodapter Installation and Maintenance Guide (Customer Information Disc)
• Agilent 1290 Infinity II LC System Installation Guide
• G1995A Low Background Site Preparation Kit Installation Guide
• Sensirion Liquid Flow Viewer Software User Manual