Agilent Infinity UHPLC Nanodapter

Význam tématu

V proteomických analýzách a dalších biochemických aplikacích často chybí dostatek vzorku pro standardní kapalinovou chromatografii. Nanodapter od Agilentu umožňuje rychlý přechod z běžných UHPLC sloupců na nano-LC toky, čímž zvyšuje citlivost a efektivitu nano-ESI hmotnostní spektrometrie.

Cíle a přehled studie / článku

Studie představuje technická data a výkonnost Agilent Infinity UHPLC Nanodapteru. Cílem je demonstrovat:

• rozsah a přesnost nano-LC toků,
• možnosti rychlého přepojení mezi režimy,
• zlepšení proteomického pokrytí při analýze E. coli digestu.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika kombinuje Agilent 1290 Infinity II Binary Pump s novým nanodapterem a G1992A Nanospray Ion Source. Klíčové komponenty:

• Binary Pump s pasivním děličem toku a inline senzorem (flow rate 100–1000 nL/min),
• Elektronický snímač toku s přímým výstupem a PC softwarem,
• 6-port ventil pro odvádění do odpadní cesty nebo na guard column,
• Trap column a nano column (0,075 × 150 mm, 2,7 µm AdvanceBio Peptide Map C18),
• G1992A Nanospray Ion Source pro vysokou ionizaci.

Hlavní výsledky a diskuse

Zařazení nanodapteru umožnilo dosáhnout:

• Retenční přesnost < 0,25 min σ,
• Maximální tlak až 1000 bar,
• Systémové zpoždění cca 5 min při 350 nL/min,
• Přepojení mezi konvenčním a nano-režimem pod 30 min.

Chromatogramy (500 ng E. coli digestu) prokázaly reprodukovatelné rozdělení špiček při tokové rychlosti 340 nL/min. Tabulka ukázala, že při gradientu 120 min bylo identifikováno v průměru ~1 265 proteinů a ~8 700 peptidů na množství 500 ng.

Přínosy a praktické využití metody

Nanodapter přináší laboratorím flexibilitu bez nutnosti dedikovaného nano-LC systému. Umožňuje:

• široký rozsah toků pro optimalizaci citlivosti,
• rychlý přechod mezi metodami pro různé aplikace,
• snadnou integraci do stávajících UHPLC platforem.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další miniaturizace a automatizace nano-LC modulů s cílem:

• zvýšit propustnost při zachování vysoké citlivosti,
• integrovat AI řízené optimalizace Gradientů a parametrů toku,
• rozšířit aplikace do klinických a environmentálních analýz s nízkými koncentracemi.

Závěr

Agilent Infinity UHPLC Nanodapter představuje praktické a výkonné řešení pro přechod na nano-LC, které zvyšuje citlivost a flexibilitu UHPLC-MS proteomických analýz. Kombinace robustní instrumentace a jednoduché obsluhy nabízí významné zlepšení pokrytí a kvality dat.

Reference

Agilent Technologies. Agilent Infinity UHPLC Nanodapter Data Sheet. 2016. 5991-7561EN.